僵狐肠道菌群的检测及乳酸菌对其消化代谢的影响

发布时间：2019-11-16 03:41

【摘要】：蓝狐(学名Alopex lagopus),又称北极狐,属于食肉目犬科动物,主要分布于北美洲北部,亚欧大陆的高纬度地区以及北冰洋与西伯利亚南部。蓝狐是珍贵的毛皮动物之一,在我国被广泛饲养,蓝狐养殖是我国特种养殖的支柱产业之一。近几年出现的蓝狐僵化症,俗称僵狐病,不仅严重影响到狐狸的健康,而且死亡率较高,即使存活也难以成长为标准商品狐,对养殖户的经济效益造成极大影响。目前认为,僵狐病的发病涉及遗传、营养、肠道菌群失调和免疫异常等因素,而且肠道内致病菌与正常菌群比例失调可能是其发病的触发点。众所周知,肠道微生物菌群与宿主的健康息息相关,它对宿主食物的消化、内源性和外源性物质的代谢、抵御致病菌的入侵等起着不可替代的作用。试验一为了探究僵狐肠道菌群的变化,根据细菌16S r DNA序列设计双歧杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、肠球菌的引物,对健康狐与僵狐肠道中的4种细菌菌属占肠道总菌的比例进行测定分析。收集30只僵狐、30只健康狐的粪便标本提取DNA,应用实时荧光定量PCR技术对两组蓝狐肠道菌群中的4种细菌的比例进行测定,对比僵狐与正常狐肠道中4种细菌数量的变化。结果表明:患病僵狐相对于健康狐而言,双歧杆菌和乳酸菌占肠道总菌(16S r DNA)数量的比例显著降低(P0.05),而肠球菌所占比例相比显著升高(P0.05),大肠杆菌的比例变化不明显(P0.05)。试验二旨在通过在饲料中添加乳酸菌添加剂,改善僵狐肠道微环境。研究不同水平的乳酸菌添加剂对僵狐营养物质消化率的影响,确定乳酸菌添加剂在僵狐日粮中的适宜添加量。将120只2月龄患病僵狐随机分成4个处理组,每组30只。试验I、II、III组在基础日粮中分别添加3%、5%、7%的乳酸菌添加剂,对照组为基础日粮,试验进行45 d。结果表明:试验I、II、III组与对照组相比日采食量均有所提高,但差异均不显著(P0.05);日增重分别提高12.94%、19.75%、14.73%,差异均显著(P0.05);料肉比II组最低,II组和III组显著低于对照组(P0.05)。试验I、II、III组与对照组相比粗脂肪的消化率分别提高19.03%、18.51%、17.22%,差异均显著(P0.05),试验II组与对照组相比粗蛋白质的消化率提高7.43%,差异显著(P0.05),钙和总磷的消化率差异均不显著(P0.05)。综上所述:患病僵狐的肠道菌群比例发生异常变化,提示肠道菌群失调可能是僵狐病的触发因素之一。乳酸菌添加剂会对肠道微生态起到一定的调节改善作用,日粮中添加乳酸菌制剂能提高僵狐的消化代谢,且本试验以添加5%乳酸菌添加剂为宜。
【图文】：

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取的 DNA 经琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测，结果由图 3-1 可以看出，，提取的 DNA 条带较亮，而且 DNA 条带上没有出现杂带，表明提取的 DNA 分子保持完整。图3-1 利用试剂盒对肠道菌群DNA进行提取的电泳图（部分样品截图）Fig. 3-1 Electrophoresis is figure of Intestinal microbial DNA extracted Kit利用细菌 16S rDNA的通用引物对提取的基因组 DNA进行检测，通过 PCR从提取的 DNA中扩增出的肠道总菌 16S rDNA 序列的长度在 1500 bp 左右，见图 3-2，通过条带可以看出，扩增出的片段长度与试验预计扩增的片段长度一致，并且扩增效果稳定，重复性好。检测结果充分说明，利用试剂盒提取的肠道总菌的基因组 DNA 可以进行后续的分子生物学试验。

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图 3-2 肠道细菌 16SrDNA PCR 扩增结果电泳图Fig. 3-2 PCR amplification of Intestinal bacteria 16SrDNA群 DNA 的 Real-Time PCR 产物的电泳检测脂糖凝胶电泳对Real-Time PCR产物进行检测的结果见下um）、乳酸菌（Lactic acid bacteria）、大肠杆菌（Esche）、总细菌基因的扩增片段的电泳结果，每种菌引物的电健康对照狐的粪便样本，每个引物的Real-Time PCR扩增且扩增得到的目的片段均呈一条的亮带，没有杂带和拖的基因组DNA都可用于Real-Time PCR。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.92

【参考文献】