一株鸽源Class Ⅰ新城疫病毒的分离鉴定及其遗传进化分析

发布时间：2019-11-28 06:54

【摘要】：新城疫又名亚洲鸡瘟是一种高发病率和死亡率的高度接触性禽类传染病。新城疫的病原为新城疫病毒,又名禽Ⅰ型副粘病毒,属于副粘病毒科、禽腮腺炎病毒属。新城疫病毒基因组为负链单股RNA,其基因结构为3'-NP-P-M-F-HN-L-5',遵循六碱基原则,分别编码6种结构蛋白和2种非结构蛋白。根据对于禽的致病性差异可以将新城疫病毒株分为3种类型,强毒力毒株、中等毒力毒株和低毒力毒株。根据病毒基因组大小和序列分析,可把新城疫病毒分为两大类,ClassⅠ和ClassⅡ。ClassⅡ分支包括大多数有毒力新城疫病毒株,其至少包括18个基因亚型。ClassⅠ分支病毒由基因1~9型组成,病毒基因组全长为15198 bp,大多数ClassⅠ新城疫病毒毒株从水禽和活禽市场中分离到。新城疫病毒的宿主范围较广,感染约250种野生鸟类,分布于大多数种属的鸟。野鸟作为新城疫病毒的一个自然储宿主,在新城疫病毒遗传进化及毒力演变过程中发挥着非常重要的作用。本论文主要研究结果如下:1.在2014年11月份,从我国青海省湟源县健康的散养家鸽中采集咽拭子和泄殖腔拭子样品共计34份,通过接种10日龄鸡胚分离法,利用血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR等方法对新城疫病毒的分离鉴定,共有2份试子样品呈现阳性(5.88%)。2.Pigeon/QH-01/Ch/14毒株的MDT大于148h,ICPI为0.00,分离毒株的F蛋白裂解位点氨基酸序列为112E-R-Q-E-R-L117。根据OIE规定的新城疫病毒的毒力致病性评估结果表明本分离毒株为弱毒力新城疫毒株。3.利用RT-PCR扩增测定Pigeon/QH-01/Ch/14毒株相互重叠的10个病毒基因片段,然后用DNASTAR软件将10个片段拼接。分离毒株的全基因序列为15198 bp,其基因结构为3'-NP-P-M-F-HN-L-5'。利用MEGA(6.02)软件,根据ML方法,将Pigeon/QH-01/Ch/14分离株的F全基因进行遗传进化分析,结果表明该新城疫病毒分离株为ClassⅠ类1b基因亚型NDV毒株。Pigeon/QH-01/14分离株与ClassⅠ类中Duck/LH/LHu B/085/2013弱毒力分离株(登录号:KM885161)的亲缘关系最近,核苷酸同源性为97.6%,遗传进化距离为0.01。本研究表明,散养家鸽不但感染基因Ⅵ型的新城疫病毒,而且也是ClassⅠ类基因1b亚型新城疫病毒的自然易感宿主之一。4.对Pigeon/QH-01/14分离株的F和HN基因的核苷酸与推导的氨基酸序列分析。结果表明:相比于大多数的ClassⅠ类与ClassⅡ类的新城疫病毒分离毒株,Pigeon/QH-01/14分离毒株的F蛋白功能域有7个氨基酸残基发生了突变,在HN蛋白功能域有13个氨基酸残基发生了氨基酸的突变替换。相比于大多数的ClassⅠ类的新城疫病毒株,在F蛋白的中和表位有3个中和表位发生了突变,在HN蛋白的中和表位有10个氨基酸残基发生了氨基酸替换。结果表明,分支ClassⅠ类基因1型新城疫病毒的遗传变异进化在不断的进行中。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65

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本文编号：2566954