牛肌肉卫星细胞中抑制MSTN表达后对脂肪代谢相关基因的影响
发布时间：2019-12-05 17:20
【摘要】：肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)属于转化生长因子β(transforming growth factor β, TGF-β)超家族成员,在骨骼肌中高表达。众多研究表明,敲除MSTN后,肌肉质量显著增大,脂肪含量变少。但抑制MSTN表达后,如何影响脂肪沉积的过程,尚未研究清楚。为了探究MSTN抑制表达后对脂肪相关基因的表达影响,本研究利用反义RNA技术,成功构建了双向表达载体pMSTN-CMV-CAG-antiMSTN,并通过Western blot筛选出抑制效果最佳的MSTN的反义载体。将最佳antiMSTN载体,RNAi926干扰载体,过表达MSTN载体分别转染牛肌肉卫星细胞48h后,Real-timePCR检测10种脂肪酸相关基因相对表达量。结果显示,抑制MSTN表达后,脂肪合成相关基因：FASNC2.29, p0.05)、ACC (2.19,p0.01)、SCD-1 (1.29, p0.05)的表达量均上调；脂肪酸氧化相关基因：CPTI-B (4.68, p0.01)、ACOX-1(1.66,p0.01)的表达量上调,ECHDC1 (0.83, p0.05)的表达量下调；脂肪分解相关基因：PPARg (2.26, p0.01)、LIPE (2.05,p0.01)的表达量上调,LPL (0.79, p0.01)的表达量下调；脂肪转运基因：FATP (1.04, p0.05)表达量不变,无显著性差异。总体来说,脂肪氧化和分解的变化(12.27)大于脂肪合成(5.77)。在牛肌肉卫星细胞和转基因小鼠个体中,利用RNA干扰技术抑制MSTN表达后,脂肪合成和降解相关基因表达结果与此有一致的表达趋势。在牛肌肉卫星细胞中,过表达MSTN,脂肪合成相关基因表达也有提升,但脂肪氧化和分解也大于脂肪合成,只是低于抑制结果的变化幅度。上述结果提示,1、在牛肌肉卫星细胞中,利用反义RNA(M3)抑制MSTN表达,可以得到与RNA干扰技术同样的抑制靶基因表达的效果。2、在牛肌肉卫星细胞和转基因鼠中MSTN敲减或过表达后脂肪相关基因的表达均显示从脂肪合成与脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移动。3、抑制MSTN表达后,PPARg表达量均显著提升,而在过表达中显著下降,与MSTN呈负相关,而CPTI-B基因与PPARg基因有相似的表达趋势。提示这两个基因可能是影响脂肪沉积的关键基因。
【图文】：
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本文编号：2570077
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