塞内加谷病毒VP1蛋白的表达纯化及鉴定

发布时间：2020-02-24 06:19

【摘要】：为表达并纯化塞内加谷病毒(Senecavirus A,SVA)的VP1蛋白,克隆SVA的VP1基因,测定其序列并构建遗传进化树,分析VP1蛋白氨基酸突变位点并预测其二级结构。然后将VP1基因克隆至载体pET-32a(+)中,IPTG诱导表达VP1重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱纯化并用W estern-blot进行验证。结果显示,表达的VP1重组蛋白的大小为48 ku,主要以包涵体形式存在,能与抗His标签的单克隆抗体发生特异性免疫反应。结果表明成功表达并纯化出VP1重组蛋白。
【图文】：

瓯ǖ赖?0株毒株、巴西2株、加拿大CAN-11-55910-3（KC667560）株基因序列的相似性较高，，为94.9％～97.0％，其中与美国US-15-40381IA（KU051393）株的相似性最高，与美国1989年报道的2株、1997年USA－1278（EU271763）株基因序列的相似性也高，为90.4％～92.0％（见表1）。通过对VP1氨基酸序列比对分析发现，从加拿大CAN-11-55910-3（KC667560）株开始，VP1蛋白有11处多肽位点相对稳定遗传（10、57、62、63、93、97、161、172、221、233、239），且地区差异不大（见表2）。用Gamier-Robson方法、Chou-Fasman方法预图1SVA－CH－01－2015VP1基因的PCR扩增Fig.1PCRamplificationofVP1geneofSVA-CH-01-2015M：DNA分子质量标准；1～3：SVA－VP1基因的PCR产物；4：阴性对照M：DL2000DNAMarker;1—3：PCRamplificationproductofSVA-VP1gene；4：NegativecontrolM12342000bp1000bp750bp500bp250bp100bp792bp502

63107）；3:BRA-MG2-2015（KR063108）；4：CAN-11-55910-3（KC667560）；5：US-15-398121A（KU051391）；6：US-15-40380IA（KU051392）；7：US-15-403811A（KU051393）；8：US-15-41901SD（KU051394）；9：USA-89-47752（EU271757）；10：USA-90-10324（EU271761）；11：USA-1278（EU271763）；12：USA-131395（EU271758）；13：USA-GBI30-2015（KT827252）；14：USA-IA46008-2015（KT757282）；15：USA-KS15-01（KX019804）；16：USA-MN15-84-22（KU359213）；17：USA-SD41901-2015（KT757281）；18：USA-SVA-OH2（KU05-8183）图2SVAVP1基因的遗传进化树Fig.2PhylogenetictreeoftheVP1geneofSVA表1SVAVP1核苷酸序列的相似性Table1GenomesequencealignmentofSVAVP1％503

【参考文献】

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【共引文献】

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