瘦素对鸭成肌细胞增殖与分化的影响

发布时间：2020-03-02 14:55

【摘要】：瘦素是一种重要的能量调控因子,存在于人体骨骼肌细胞,而瘦素在鸭肌肉生长和发育过程中的作用还不十分清楚。本实验采用离体培养鸭成肌细胞、CCK-8、荧光定量PCR等技术,探索瘦素调控鸭成肌细胞的增殖和分化机理。结果表明:1 ng/mL瘦素促进鸭成肌细胞生长,而10 ng/mL和100 ng/mL显著抑制成肌细胞生长(P0.05);瘦素处理24 h后,1 ng/mL组的Myf5和MyoD的表达量最高,10 ng/mL组的Myf5和100 ng/mL组的MyoD的表达量最低(P0.05);而MRF4和MyoG在各个浓度处理组的表达量均显著下降(P0.05);1 ng/mL瘦素处理24 h后,AMPK和PI3K的表达量也显著升高(P0.05),即AMPK和PI3K参与瘦素调控鸭成肌细胞生长发育过程;分别抑制AMPK和PI3K信号通路后,瘦素诱导Myf5和MyoD表达被减弱(P0.05),而MRF4和MyoG的表达上升仅在AMPK被抑制组(P0.05)。以上数据表明,瘦素可通过激活AMPK和PI3K信号通路调控鸭成肌细胞增殖和分化,但是AMPK信号通路作用性应大于PI3K信号通路。
【图文】：

-52-繁殖生理·ReproductionandPhysiology2017年第53卷第2期且1ng/mL组显著高于10、100ng/mL组（P<0.05），10ng/mL与100ng/mL组间均没有显著差异。因此，瘦素可促进鸭成肌细胞增殖而抑制分化，且具有浓度依赖性，且将1ng/mL作为后续实验的处理浓度。2.3瘦素激活AMPK和PI3K信号通路由图5可知，1ng/mL瘦素处理鸭成肌细胞24h后，AMPK和PI3K的表达量显著上升（P<0.05），即AMPK和PI3K参与瘦素调控鸭成肌细胞发育过程。2.4抑制AMPK信号通路后瘦素对鸭成肌细胞增殖量检测。2.2瘦素对鸭成肌细胞增殖和分化的影响为了检测瘦素在鸭成肌细胞增殖中的作用，本实验利用不同浓度的外源性瘦素（1、10、100ng/mL）处理细胞24h。CCK-8检测结果显示，1ng/mL组显著高于对照组（P<0.05），表明其促进成肌细胞的增殖；而10、100ng/mL组显著低于对照组（P<0.05），说明其抑制成肌细胞增殖（图3）。RT-qPCR检测瘦素调节鸭成肌细胞增殖与分化关键基因（图4）。1ng/mL组MyoD和Myf5表达量显著高于对照组（P<0.05），，而10、100ng/mL组显著抑制MyoD和Myf5的表达。瘦素所有浓度处理组MoyG和MRF4mRNA表达量均显著低于对照组（P<0.05），图1离体培养的鸭成肌细胞A：培养2h后；B：培养12h图2鸭成肌细胞总RNA电泳28s18s5sDO值1.51.00.50图3不同浓度瘦素处理24h鸭成肌细胞活性86420对表达水平相图5瘦素激活AMPK和PI3K信号通路对表达水平相图4不同浓度瘦素对鸭成肌细胞增殖与分化关键基因表达的影响543210

-52-繁殖生理·ReproductionandPhysiology2017年第53卷第2期且1ng/mL组显著高于10、100ng/mL组（P<0.05），10ng/mL与100ng/mL组间均没有显著差异。因此，瘦素可促进鸭成肌细胞增殖而抑制分化，且具有浓度依赖性，且将1ng/mL作为后续实验的处理浓度。2.3瘦素激活AMPK和PI3K信号通路由图5可知，1ng/mL瘦素处理鸭成肌细胞24h后，AMPK和PI3K的表达量显著上升（P<0.05），即AMPK和PI3K参与瘦素调控鸭成肌细胞发育过程。2.4抑制AMPK信号通路后瘦素对鸭成肌细胞增殖量检测。2.2瘦素对鸭成肌细胞增殖和分化的影响为了检测瘦素在鸭成肌细胞增殖中的作用，本实验利用不同浓度的外源性瘦素（1、10、100ng/mL）处理细胞24h。CCK-8检测结果显示，1ng/mL组显著高于对照组（P<0.05），表明其促进成肌细胞的增殖；而10、100ng/mL组显著低于对照组（P<0.05），说明其抑制成肌细胞增殖（图3）。RT-qPCR检测瘦素调节鸭成肌细胞增殖与分化关键基因（图4）。1ng/mL组MyoD和Myf5表达量显著高于对照组（P<0.05），而10、100ng/mL组显著抑制MyoD和Myf5的表达。瘦素所有浓度处理组MoyG和MRF4mRNA表达量均显著低于对照组（P<0.05），图1离体培养的鸭成肌细胞A：培养2h后；B：培养12h图2鸭成肌细胞总RNA电泳28s18s5sDO值1.51.00.50图3不同浓度瘦素处理24h鸭成肌细胞活性86420对表达水平相图5瘦素激活AMPK和PI3K信号通路对表达水平相图4不同浓度瘦素对鸭成肌细胞增殖与分化关键基因表达的影响543210

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本文编号：2584346