PSMA1对牛前体脂肪细胞分化及脂质沉积的影响

发布时间：2020-03-14 15:47

【摘要】：脂肪组织对机体能量代谢和平衡具有重要作用，同时对于动物的肉质具有重要影响。肌间脂肪含量是影响牛肉的嫩度、多汁性和口味的重要因素之一。而前体脂肪细胞是具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化细胞，其增殖和分化会影响脂肪沉积及肌间脂肪含量，，进而影响牛肉肉质。 研究表明，TNNT1、HBA、HBB、MB、MYLPF、MYL1、PGAM2、MYL6B、HSPB1、TPI、MSRA、TNNI2、TNNT3、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1、GSTP1等基因在不同肌间脂肪沉积情况的牛肉中存在差异表达。本研究首先分离牛前体脂肪细胞，诱导其分化为成熟脂肪细胞，通过油红O检测脂类沉积情况，并通过实时荧光定量PCR及Western Blot检测上述基因在前体脂肪细胞分化前后的mRNA及蛋白表达情况。结果表明，PSMA1、HBB、COX6B1、MYLPF、TPI、PGAM2、HBA、TCAP、GSTP1、MB、TXN、GSTM1、MYL6B、MSRA、HSPB1、TNNT1在前体脂肪细胞分化后mRNA和蛋白质的表达量上升，而VDAC1、MYL1表达量下降，TNNI2、TNNT3没有检测到表达。同时，前体脂肪细胞分化后脂质沉积明显加大，说明这些基因可能在调节前体脂肪细胞分化、脂质沉积中具有潜在作用。 随后，本研究选择表达差异较大的PSMA1基因作为研究对象，探求其在牛的前体脂肪细胞分化及脂质沉积的作用。首先将合成的siRNA通过脂质体2000转染至前体脂肪细胞中，特异性敲减PSMA1的表达，通过油红O染色、甘油三酯含量检测及荧光定量PCR法分别检测脂质沉积情况及前体脂肪细胞分化标志基因的表达情况。结果表明，PSMA1的低表达会抑制脂肪细胞中脂滴形成和聚集，脂肪细胞甘油三酯累积减少，部分分化标志基因表达量显著下降。这些结果对明确前脂肪细胞分化及脂质沉积机制、为在分子水平上调控牛脂肪沉积、改善肉质提供了理论依据。
【图文】：

（3）二抗孵育：取出 NC 膜，室温下 1×TBST 摇床上漂洗 3 次，每次 5min。同方法稀释二抗，于室温摇床孵育2h。室温下1×TBST漂洗3次，每次10min。（4）将膜放入化学发光仪中，在膜表面滴加化学发光液，显影照相，灰度分析。3 实验结果.1 分离出牛的前体脂肪细胞胶原酶消化分离出的肠系膜脂肪组织后，细胞单个漂浮于培养基中。培养 后有少量细胞贴壁，如图 1.1 A，培养 8d 后，细胞形态变为长梭形，如图 1.1

图 1.2 诱导分化脂肪细胞油红 O 染色Figure 1.2 Inducd adipocyte by oil red O staining.3.3 标志基因在分化前后表达情况比较.3.3.1 细胞总 RNA 提取结果根据 Trizol 一步法操作步骤，提取分化前后脂肪细胞 RNA，经 1%琼脂糖胶电泳鉴定，见图 1.3，图中无杂带，28S、18S、5S 三条带清晰，总 RNA 提比较完整，总 RNA OD260/OD280 比值在 1.8~2.0 之间，且样品浓度均在00-600ng/μL 之间，可以用于后续的一系列实验。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S823

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本文编号：2587007