ERK通路关键基因在鹅等级前卵泡中的表达规律研究

发布时间：2020-03-21 18:33

【摘要】：近年来中国养殖业中出现了一个的朝阳产业,它慢慢成为了中国养殖业浓墨重彩的一笔,它就是鹅养殖业。制约鹅养殖业及其副业发展的因素有很多其中鹅的季节性产蛋特性是最关键的一环。为了解决这一问题,我们需要研究鹅卵泡的发育原理从而更好的助力鹅养殖业的发展。现在已经有学者研究发现,ERK信号通路可以通过一些途径来调控家禽的等级前卵泡的发育状态。本试验采集籽鹅等级前卵泡并以此为试验样本。使用qPCR技术、Western Blot技术和IHC技术用来检测目的基因mRNA水平以及蛋白质水平的表达情况和目的基因在籽鹅等级前卵泡中的表达位点情况。研究结果如下:(1)qPCR试验技术研究籽鹅等级前卵泡中ERK信号通路中关键基因的mRNA表达水平,并检验其显著性。结果显示,在籽鹅五种等级前卵泡中所有目的基因均有表达并且数据结果存在着显著性差异(p0.05)。其中Raf1、Myc、Mek1基因的表达规律呈现先增加后减少再增加再减少的“M”型趋势,目的基因Raf1、Myc在LWF中的表达量最高,目的基因Mek1在SWF中的表达量最高;目的基因Hras、Mos、ERK的表达规律呈现持续减少趋势,在PF卵泡中的表达量最高。目的基因Srf的表达规律呈现先减少再增加再减少再增加的“W”型趋势,其表达量在SYF中最高。(2)通过相关性分析qPCR的试验结果,试验结果表明在不同发育阶段的卵泡中ERK信号传导途径中相邻基因之间的相关性存在差异,不同发育阶段的不同等级卵泡的相关性与信号传导途径中任意两个基因的相关性也存在一定的差异。(3)通过免疫组织化学试验对籽鹅五种等级前卵泡中目的蛋白Hras、Mek1和ERK的表达位点进行分析。结果表明,在籽鹅五种等级前卵泡中的颗粒层细胞(GC)和膜层细胞(TC)中都检测出了表达位点,并且结果为阳性表达。(4)通过蛋白免疫印迹技术研究了籽鹅五种等级前卵泡中目的基因Hras、Mek1和ERK的蛋白质表达水平。结果显示,五种等级前卵泡中三种目的蛋白均有表达。其中目的蛋白ERK在SWF中表达量最高,在SYF中表达量最低(P0.05)。目的蛋白Hras在SWF中表达量最高,在LWF中表达量最低(P0.05)。目的蛋白Mek1在PF中表达量最高,在MWF中表达量最低(P0.05)。(5)结合ERK信号通路上基因的表达规律及卵泡发育规律可发现,ERK信号通路对籽鹅等级前卵泡存在一定的促进作用。
【图文】：

前卵,等级,卵泡

随着卵泡的进一步发育，其体积也随之迅速增量卵黄。同时，卵泡分化形成放射带，结缔组织开始受到下丘脑到垂体到性腺的调控轴调控，从而泡的直径大小对鹅的卵泡进行分类。本文将卵泡分级卵泡[38]。如图 1.1 所示，鹅产蛋期的卵巢内会有甚至数百个体积小的等级前卵泡[39]。按照直径由，F2 卵泡，F3 卵泡，F4 卵泡，F5 卵泡和 F6 卵泡[40]。根据直径大小等级前卵泡 10-15mm 为 SY MWF 和 2-4mm 为 SWF。小于 2mm 的为初级卵泡黄”结构并不像他的名字一样是黄色的而是白色的行体内外培养 FSH 实验发现，和体内刺激不同的后并不会对卵泡的发育造成影响，而刺激等级卵泡。这表明等级前卵泡与等级卵泡的生长和发育之

信号通路

图 1.2 ERK 信号通路图Fig.1.2 ERK signal path diagramERK 信号通路传导途径与经典的三步酶促级联反应一致，Ras - Raf -MEK -ERK是ERK通路的主要途径。细胞外的各种细胞外刺激与受体结合并释放Ras。通过三磷酸鸟苷（GTP）与二磷酸鸟苷（GDP）结合激活 Ras，活化的 Ras 具有高亲和力并与 Raf 的 N-末端结构域结合，，将 Raf 从细胞质转移至胞膜，并且在胞膜上被 Raf 激酶激活[60]; 活化的 Raf 其 C 端催化结构域与 MEK 结合，使其亚区中的两个丝氨酸（Thr 和 Ser）磷酸化，激活 MEK; MEK 是一种罕见的双重特异性激酶，可激活 ERK 的苏氨酸，酪氨酸双位点磷酸化后可激活 ERK[61]。活化后的 ERK 可以转移到细胞核中，磷酸化多种转录因子，调控转录相关基因的表达，并最终介导细胞生长，分化，转移和凋亡等过程[62]。ERK(extracellular signal-regulated kinase)信号通路是由 Sturgill 等人在 1986年首先报告的 MAPK 信号通路。刚开始学者们依据它的底物蛋白为其的命名十分混乱[63]。近年来，随着科学研究的进展又发现许多 MAPK 家族成员，所以又重用名 ERK。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S835

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