关中奶山羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及毒力基因和耐药性检测

发布时间：2020-03-25 01:04

【摘要】：羊伪结核病由伪结核棒状杆菌引起,该病几乎存在于世界上所有的绵羊和山羊生产养殖区域,我国内蒙古、陕西、甘肃、新疆、云南、上海、浙江、广西和广东等地均有报道。由于其具有慢性和亚临床感染特征,为养羊业带来了重大的经济损失。富平是中国重要的奶山羊养殖基地,关中奶山羊养殖已成为富平农村地区的经济支柱产业。近年,富平奶山羊羊群中伪结核病广为流行,严重影响了羊养殖产业的健康生产。本研究在陕西富平不同地区的养殖场,调查伪结核病疫情并采集了疑似伪结核病患羊的脓汁样品,通过分离纯化、革兰染色镜检、生化试验、PCR检测等方法对分离菌株进行鉴定;通过PCR方法检测毒力基因;通过K-B纸片法对病原菌进行药物敏感性试验,进一步检测其耐药基因。获得的研究结果如下:1.从陕西富平地区采集的23份患病奶山羊脓汁样品中分离出了14株疑似伪结核棒状杆菌菌株。分离菌株在含5%绵羊鲜血的琼脂培养基上呈白色,菌落边缘整齐,易被推动,干燥且易碎;革兰染色阳性,菌体多为球杆状或棒状,无芽孢、无荚膜、不能运动,多呈单个散在分布或呈栅栏状、“V”型排列。分离菌株的菌落特征和染色镜检结果与伪结核棒状杆菌相符;分子生物学检测结果表明,14株分离菌与GenBank中C.p参考株16S rRNA核苷酸同源性达99%以上。2.对伪结核棒状杆菌的毒力基因检测表明,14株菌株均扩增出了伪结核棒状杆菌的5种主要毒力基因,包括PLD,Fag A,Fag B,Fag C,Fag D。3.药物敏感性试验结果显示,本次分离菌株对四环素、青霉素、克拉霉素、利福平、头孢唑啉等多种抗生素敏感,对阿米卡星、链霉素等抗生素表现耐药;耐药基因检测发现86%(12/14)的分离菌株携带有介导氨基糖苷类药物的耐药基因,100%(14/14)的分离菌株携带介导β-内酰胺类药物的耐药基因,未检测到介导利福平的耐药基因。
【图文】：

西北农林科技大学硕士学位论文/mL 的琼脂糖凝胶，在胶孔中依次加入电泳仪电压 120 V、电流 10A，30 min。。羊鲜血的琼脂培养基上培养 24 h 后呈（图 2-2，a），培养至 48 h，其直径可分离纯化的单菌落在 LB 液体培养基中上部澄清，而试管底部出现颗粒样沉淀呈单个散在分布或呈栅栏状、“V”型排列结果与伪结核棒状杆菌相符。

β溶血环出现。分离纯化的单菌落在 LB 液体培养基中培养 24 h 后，48 h 后培养基上部澄清，，而试管底部出现颗粒样沉淀。革兰染色阳状或棒状，多呈单个散在分布或呈栅栏状、“V”型排列（图 2-2，b）征和染色镜检结果与伪结核棒状杆菌相符。图 2-1 羊伪结核病临床病变Fig.2-1 ovine pseudotuberculosis clinical pathology
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.61

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本文编号：2599149