表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热病毒Snyder Hill株的研究
发布时间：2020-03-26 20:43
【摘要】：狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的一种致死性人畜共患传染病,能引起人和哺乳动物的急性、渐进性致死性脑膜脑炎。全球每年约有59,000人以及数十万的动物死于狂犬病,其中95%以上的死亡病例发生在亚洲和非洲,99%以上的人狂犬病死亡病例是由感染RV的犬舔舐或咬伤引起。减少和控制人感染狂犬病病例数最有效的方法是提高犬的免疫覆盖率,当犬的免疫覆盖率达到70%便可从源头上控制、消除狂犬病。目前,狂犬病弱毒活疫苗已禁止生产和使用;灭活疫苗虽安全有效,但成本高昂。因此,研制一种高效、安全、价格低廉的动物狂犬病疫苗仍具有较高的应用价值和现实意义。犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一种在犬科、鼬科、浣熊科以及其它肉食动物之间广泛传播的一种病毒性传染病。该病呈季节性流行,且宿主范围不断扩大,呈世界性分布,严重威胁畜牧养殖业的健康发展。CD弱毒疫苗能有效预防和控制该病在肉食动物之间的传播,应用广泛。反向遗传技术的发展和成熟使CDV作为疫苗载体成为可能。CDV也具备作为疫苗载体应用的潜力,以CDV为载体构建CDV/RV二联活载体疫苗可实现一苗两防、经济高效的提高狂犬病免疫覆盖率。本研究以本实验室分离的CDV Snyder Hill疫苗株为亲本毒株,建立其反向遗传操作系统,拯救成功的病毒rCDV和野生型CDV Snyder Hill在Vero细胞上保持相似的生长特性,在感染后120 h病毒滴度达到最高1×10~6.1.1 TCID_(50)/mL。为探索CDV Snyder Hill株作为活病毒载体表达外源基因的潜力,在CDV基因组P、M之间插入外源基因EGFP构建重组病毒rCDV-EGFP,经生长曲线和遗传稳定性检测,重组病毒与亲本株rCDV的生长特性相似,且重组病毒在Vero细胞上连续传18代仍能高效、稳定表达EGFP,具有良好的遗传稳定性。在此基础之上,构建了重组病毒rCDV-RVG,经IFA、Western Bloting鉴定分析,RVG蛋白在重组病毒感染的细胞中正确、稳定表达,拯救的重组病毒与亲本株病毒在Vero细胞上具有相似的生长动力学曲线,病毒滴度最高可达1×10~5.7.7 TCID_(50)/mL。犬免疫实验证明,重组病毒rCDV-RVG以10~5.5.5 TCID_(50)/mL/只剂量免疫犬3 w后,犬体内均可产生特异性CDV、RV中和抗体,其中RV中和抗体平均值为21.71 IU/mL,远高于RV中和抗体保护临界值0.5 IU/mL。本研究结果表明,表达RVG蛋白的重组犬瘟热病毒rCDV-RVG具备作为狂犬病重组活载体疫苗的潜力。
【图文】：
病病毒分子特征Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus, RV）引发的人兽共患中枢神经系率几乎达 100%，是一种重要的人兽共患传染病(扈荣良, 2007)。RV 为ae），属于狂犬病病毒属（Lyssavirus）(ChristianRupprecht, 2014; Walker e称作弹状病毒是因为 RV 病毒颗粒为子弹状，病毒的一端半圆形，另一由外壳和核心两部分组成，外被囊膜，囊膜上具有可与细胞受体结合, G），可形成三聚体突起，内侧主要是膜蛋白，即基质蛋白。RV 内部为 基因组 RNA、核蛋白、磷蛋白以及 RNA 大聚合酶蛋白相互结合而形核蛋白复合体（Ribonucleoprotein complexes, RNPs）(TordoKouknetzoff 复制过程中保护核酸免受核酸酶的降解(P. Liu et al., 2004)。为不分节段单股负链 RNA，全长约 12 knt，，含有 5 个由短调控序列间格保守有序地编码相应的核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、大蛋白（L），其阅读框大小依次为 1424 nt、991 nt、805 nt、1675 nt 和 6475ller et al., 2009)。狂犬病病毒根据血清型的不同可分为 5 种血清型，按照可分为 7 种基因型。
瘟热病毒颗粒结构模式图（Fields virology,5th Edidel of canine distemper virus（Fields virology,5th E负链 RNA 病毒，其基因组大小为 15,690 n’端到 5’端可依次编码 N、P、M、F、H 和码结构蛋白 P 的同时还可编码 V、C 两种 可与 N、P、L 三种蛋白组成 RNPs，在病小感染单元。分布，其宿主范围逐年扩大且可跨种间传播D 的特效治疗药物，依靠疫苗进行免疫接D 灭活疫苗、弱毒疫苗是目前国内外通用 年将病犬的脑组织经福尔马林灭活制备的柱等用静水压高压法灭活 CDV，并以蜂胶林制备的灭活疫苗获得更高的中和抗体，Cirone 等应用 CD 弱毒疫苗株 Onderstepo
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65
本文编号：2601940
【图文】：
病病毒分子特征Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus, RV）引发的人兽共患中枢神经系率几乎达 100%，是一种重要的人兽共患传染病(扈荣良, 2007)。RV 为ae），属于狂犬病病毒属（Lyssavirus）(ChristianRupprecht, 2014; Walker e称作弹状病毒是因为 RV 病毒颗粒为子弹状，病毒的一端半圆形，另一由外壳和核心两部分组成，外被囊膜，囊膜上具有可与细胞受体结合, G），可形成三聚体突起，内侧主要是膜蛋白，即基质蛋白。RV 内部为 基因组 RNA、核蛋白、磷蛋白以及 RNA 大聚合酶蛋白相互结合而形核蛋白复合体（Ribonucleoprotein complexes, RNPs）(TordoKouknetzoff 复制过程中保护核酸免受核酸酶的降解(P. Liu et al., 2004)。为不分节段单股负链 RNA，全长约 12 knt，，含有 5 个由短调控序列间格保守有序地编码相应的核蛋白（N）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、大蛋白（L），其阅读框大小依次为 1424 nt、991 nt、805 nt、1675 nt 和 6475ller et al., 2009)。狂犬病病毒根据血清型的不同可分为 5 种血清型，按照可分为 7 种基因型。
瘟热病毒颗粒结构模式图（Fields virology,5th Edidel of canine distemper virus（Fields virology,5th E负链 RNA 病毒，其基因组大小为 15,690 n’端到 5’端可依次编码 N、P、M、F、H 和码结构蛋白 P 的同时还可编码 V、C 两种 可与 N、P、L 三种蛋白组成 RNPs，在病小感染单元。分布，其宿主范围逐年扩大且可跨种间传播D 的特效治疗药物，依靠疫苗进行免疫接D 灭活疫苗、弱毒疫苗是目前国内外通用 年将病犬的脑组织经福尔马林灭活制备的柱等用静水压高压法灭活 CDV，并以蜂胶林制备的灭活疫苗获得更高的中和抗体，Cirone 等应用 CD 弱毒疫苗株 Onderstepo
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65
【参考文献】
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1 沈朝建;贾智宁;孙向东;杨楠;黄保续;刘拥军;;我国犬狂犬病流行与相关风险因素调查分析[J];中国兽医杂志;2011年10期
本文编号：2601940
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