云霄县PRRS血清学调查及3株PRRSV GP5基因分析
发布时间：2020-03-30 12:10
【摘要】：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是对养猪业危害最大的疾病之一,每年给全世界带来巨大的经济损失。PRRS可导致猪群出现精神倦怠,厌食发热,早产、流产、死胎、木乃伊及弱仔等症状,并影响免疫调节功能。云霄县是漳州市生猪重要基地之一,PRRS的流行也给云霄县的养猪业带来严峻的挑战。本研究通过对猪群进行PRRS抗体检测和抗原检测,分析目前云霄县PRRSV的流行及遗传变异情况,为云霄县对PRRS的防控提供理论基础。本研究采集了云霄县2013-2017年种猪场、商品代饲养场、散养场己免疫蓝耳病疫苗的猪血清样本共计3865份。对不同年份、季节的血清样品进行PRRS免疫阳性率进行调查。为进一步了解云霄县PRRSV的遗传变异发生情况,本研究针对GP5基因设计一对特异性引物,对采集的临床病料进行RT-PCR检测并进行测序,从阳性样品中选取3株同源性较低的基因序列进行分析。对测序序列进行抗原位点、糖基化位点、磷酸化位点、跨膜结构、二级结构分析,并与NCBI里的参考毒株序列进行比对分析。本研究取得如下结果:1.2013-2017年猪血清PRRS抗体阳性率最高的是2013年(84.85%),最低的是2014年(82.90%);不同类型养殖场的抗体阳性率存在差异,抗体阳性率的大小排列顺序为种猪场(87.73%)商品代饲养场(83.13%)散养户(77.50%)。猪群夏秋两季的抗体阳性率明显高于冬春两季。2.经测序分析表明,3株PRRSV与参考株的同源性在61.9%-99.5%之间。FJYX-1相对参考株,在第23、41位氨基酸出现了磷酸化位点变异,FJYX-2在第23位氨基酸出现了磷酸化位点变异;FJYX-3序列相对参考株未见明显变异。3株PRRSV糖基化位点未见明显变异。将3株PRRSV GP5蛋白氨基酸序列与参考株进行比对分析表明,FJYX-1第15、23、41、196位氨基酸位点分别发生了脯氨酸、丝氨酸、丝氨酸、精氨酸变异,FJYX-2第23、151、196位氨基酸分别发生了丝氨酸、赖氨酸、精氨酸变异,FJYX-3第28、33、193、196位氨基酸分别发生了脯氨酸、谷氨酰酸、丙氨酸、组氨酸变异。对所测序列翻译成氨基酸后进行同源性分析(图3-5)抗原肽段预测结果表明这3个毒株的GP5蛋白存在7-8个抗原位点,其中FJYX-2毒株抗原位点多出了一个143-NFLLDTK-149抗原肽段。综上所述,目前云霄县的PRRS免疫阳性率较好。从实验分析的3株PRRSV与参考毒株对比结果来看,糖基化位点未见明显的变异,而磷酸化位点、氨基酸位点和抗原肽段都存在一定程度的变异,我们需要密切监视PRRSV的变异情况,为云霄县PRRSV的防控提供有效的理论依据。
【图文】：
２结果逡逑２．１临床病料ＰＲＲＳＶ检测逡逑根据所设计的ＰＲＲＳＶ引物进行ＰＣＲ扩增，试验结果表明（图３－１），阳性逡逑样品能够扩增出１条约６０３ｂｐ的条带，与预期片段大小相符，而阴性对照并未出逡逑现特异性条带。对云霄县动物疾病预防控制中心２０１３－２０１７保存临床病料３２份逡逑进行ＲＴ－ＰＣＲ，结果显示，有１２份的病料检测为ＰＲＲＳＶ阳性，阳性率为３７．５％。逡逑Ｍ邋１逦２逡逑７５０逡逑５００邋＇ＩＨｗＭ＇逡逑图３－１邋ＰＲＲＳＶ阳性病料ＰＣＲ检测结果逡逑Ｆｉｇ．邋３－１邋ＰＣＲ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＲＲＳｖ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｖｅｎｅｒｅａｌ邋ｄｉｓｅａｓｅｓ逡逑Ｍ：质量分析ＤＬ２０００邋１．阴性对照２．阳性样品逡逑Ｍ：ＤＬ２０００邋ｍａｒｋｅｒ邋１．邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋２．邋Ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑２．２邋３株ＰＲＲＳＶ毒株测序及分析逡逑ＰＣＲ产物送生物公司测序，，选取１２条测序结果中３条同源性相对较低的逡逑序列见附录Ａ。对测得的序列进行遗传进化分析（图３－２）。结果显示，ＦＪＹＸ－１、逡逑ＦＪＹＸ－２、ＦＪＹＸ－３都与ＨｕＮ、ＴＪ和ＪＸＡ１等蓝耳病毒株同属一个分支，而与ＭＮ１８４、逡逑ＬＶ、ＮＡＤＣ－３０等毒株遗传距离相对较远。对所测序列进行同源性分析（图３－３），逡逑结果显示，３株序列同源性在９２．９％－９６．７％之间，ＦＪＹＸ－１和ＦＪＹＸ－３，同源性最逡逑２４逡逑
１逦桯悘ｉｔ逦工逡逑Ｆｏｉｓｒｘ－３．邋－Ｃ３Ｃ．－Ｃ逦２．００逡逑Ｃｏｉｉｓｅｒｓｓｕｓ逦ｊｊｇ－ｔｃｉｗｉａｒｓｋｆ邋ｄｗａ＇ｖｅｔｆ＇ｖｉｆ邋ｐｖｌｔｆａｉ＇ｖｓｙｇａｌｔｉ＇Ｃｓｉ＇ａｆ邋Ｉｄｌｔｖｇｌ邋ｔｖｓｔａｇ逡逑ＡＴＣＣ＿ＶＲ２３３２邋．邋ｔｘｔ邋：ＳＶ逦３．５０逡逑ＣＨ—２．ａ．邋Ｃ－ｘｒ．逦Ｆ邋２逦５．５０逡逑ＣＨ－３．Ｒ．邋ｔｉｅｒ．逦Ｆｌｉｆ逦＾ｇｃ逦１５０逡逑－ｉ＾．－ｃｘ－ｃ逦Ｙｙ逦｜逦１５０逡逑ｕＸＡｌ邋．邋ｔｘｔ：逦ＹＹ逦＾ｇＳ邋＾ｇＸ逦２．５０逡逑Ｉ－ＩＭ２．２邋４Ａ．邋ｒｘｒ逦ＹＣ逦ｊ逦ｇｌ：逦Ｊ．５0逡逑ＨＡ３ＤＣ－３０邋．邋ＣｘＣ逦ＹＹ逦Ｋｌ：逦１．５０逡逑Ｒ９Ｓ邋－邋ｎｘ－ｃ逦Ｆｖ逦ｉ逦＾＾ＥＳ邋Ｋ：＾逦￣ｓｏ逡逑Ｔｖｊ．邋Ｃ．ＸＣ逦Ｙ邋２逦ｊ逦＾ｇｌ；逦２５０逡逑Ｆ＂ｊｒｙｘ—３．邋．邋ｎｘＴ．逦Ｗ逦３．３０逡逑Ｆ０￣ｈＴＸ－２邋．邋ｔｘｒ逦ＹＹ逦ｉ邋霞邋１■榅２．ｓｏ逡逑Ｃｏｎｓｅｎｓｔｉｓ逦ｉ’ｙｈｇ：ｒｙｖＩＬｓｓＪ＿ｙａｉＶｃ；ａｉ３邋３ｌｉｃ；ｆ邋■ｖｉｚｒｉａｌｔｒ＾ｃｓｉＥｓｗｉ＇ｙ邋ｓｅ＇ＣＸ＇ｙｔｎｆ邋ｌｌｄｔｋｇ逡逑ＡＴＣＣ＿ＶＲ２３３２邋．邋ｔｘｒ．逦２．９９逡逑ＣＨ－ｌａ．－ｃｘｒ；逦ｐ＇劳＇：R荩保冲澹冲义希茫龋常遥澹颍沐危皱危В保瑰澹瑰义希龋簦幔拢剩澹簦簦哄危鲥危常常瑰义希剩兀粒插澹澹茫兀裕哄危蓿鲥澹皱危保梗瑰义希停蹋郑澹簦沐危慑澹遥垮危蓿纾欤椋唬遥郑靛危埃梗瑰义希停湾宥澹插澹矗粒澹礤危桑慑澹樱危掊危渝澹铃伪福颍皱
本文编号：2607527
【图文】：
２结果逡逑２．１临床病料ＰＲＲＳＶ检测逡逑根据所设计的ＰＲＲＳＶ引物进行ＰＣＲ扩增，试验结果表明（图３－１），阳性逡逑样品能够扩增出１条约６０３ｂｐ的条带，与预期片段大小相符，而阴性对照并未出逡逑现特异性条带。对云霄县动物疾病预防控制中心２０１３－２０１７保存临床病料３２份逡逑进行ＲＴ－ＰＣＲ，结果显示，有１２份的病料检测为ＰＲＲＳＶ阳性，阳性率为３７．５％。逡逑Ｍ邋１逦２逡逑７５０逡逑５００邋＇ＩＨｗＭ＇逡逑图３－１邋ＰＲＲＳＶ阳性病料ＰＣＲ检测结果逡逑Ｆｉｇ．邋３－１邋ＰＣＲ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＲＲＳｖ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｖｅｎｅｒｅａｌ邋ｄｉｓｅａｓｅｓ逡逑Ｍ：质量分析ＤＬ２０００邋１．阴性对照２．阳性样品逡逑Ｍ：ＤＬ２０００邋ｍａｒｋｅｒ邋１．邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋２．邋Ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑２．２邋３株ＰＲＲＳＶ毒株测序及分析逡逑ＰＣＲ产物送生物公司测序，，选取１２条测序结果中３条同源性相对较低的逡逑序列见附录Ａ。对测得的序列进行遗传进化分析（图３－２）。结果显示，ＦＪＹＸ－１、逡逑ＦＪＹＸ－２、ＦＪＹＸ－３都与ＨｕＮ、ＴＪ和ＪＸＡ１等蓝耳病毒株同属一个分支，而与ＭＮ１８４、逡逑ＬＶ、ＮＡＤＣ－３０等毒株遗传距离相对较远。对所测序列进行同源性分析（图３－３），逡逑结果显示，３株序列同源性在９２．９％－９６．７％之间，ＦＪＹＸ－１和ＦＪＹＸ－３，同源性最逡逑２４逡逑
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