鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选及免疫持续期的初步研究

发布时间：2020-03-31 18:42

【摘要】：禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)常引起家禽发生多种肠道外疾病如心包炎、气囊炎、肝周炎、蜂窝织炎及败血症,具有较高的感染率和死亡率,给养禽业带来严重损失。以本实验室构建的禽致病性大肠杆菌脂多糖缺失株E516△lpxL△lpxM(O1)、E058△lpxL△lpxM(O2)、E522△lpxL△lpxM(078)株作为制苗菌株等比例混合,分别辅以白油佐剂道达尔170、白油佐剂Marc52和铝胶佐剂研制了相应三价灭活疫苗,并对三种佐剂疫苗进行了安全性和免疫效力比较试验,以确定合适的疫苗佐剂。疫苗佐剂确定后,对该三价疫苗的免疫持续期进行研究。现将研究结果报告如下:1、三种不同佐剂疫苗的安全性比较利用制备的三种不同佐剂灭活疫苗,分别以单剂量0.5 mL/羽和双倍剂量1.0 mL/羽接种14日龄SPF鸡进行安全性试验。试验结果表明,注射白油佐剂灭活疫苗组的鸡,以单剂量0.5 mL/羽免疫,接种疫苗后12-24 h,部分鸡出现短时精神沉郁,之后无任何不良反应:以双倍剂量1 mL/羽免疫时,接种疫苗后5-8 h试验鸡出现精神不佳,24 h内恢复正常,由于双倍剂量组免疫剂量较大,部分试验鸡注射部位出现0.1-1.2 cm大小不等的结节,但未出现全身不良反应,免疫一周注射部位结节逐渐消失,生长状况良好。注射铝胶佐剂灭活疫苗组的鸡,在整个观察期内饮食和精神状态均正常,注射部位亦未见异常。以上结果说明我们所研制的油佐剂疫苗具有良好的安全性。2、三种不同佐剂疫苗的免疫效力试验以三种不同佐剂疫苗对14日龄SPF鸡进行免疫,42日龄时分别以亲本株E516(O1)、E058(02)和E522(078)攻毒,进行免疫保护试验。试验结果表明,白油佐剂道达尔170疫苗组攻毒后保护比均为7/10,白油佐剂Marc52疫苗组攻毒后保护比分别为5/10、5/10和7/10,铝胶佐剂疫苗组攻毒后保护比分别为3/10、3/10和5/10,攻毒对照组攻毒后死亡比均为10/10。以上试验结果表明,铝胶佐剂疫苗对同源野生株攻毒鸡的免疫保护效果差,白油佐剂道达尔170和白油佐剂Marc52疫苗尤其是前者对同源野生株攻毒鸡可以提供良好的免疫保护。综合安全性试验和免疫保护试验,我们确定白油佐剂道达尔170佐剂作为研制疫苗的佐剂。3、鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗的免疫持续期试验以鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗对14日龄SPF鸡进行免疫,分别在免疫后第30 d、第60 d和第90 d进行亲本株攻毒试验,对保护效力、特异性抗体水平及组织病理变化进行评价。试验结果表明,免疫后第30 d、第60 d和第90 d攻毒,试验鸡均得到不同程度较好保护。由于成年鸡对致病性大肠杆菌的敏感性降低,90日龄试验鸡攻毒对照组死亡比减少属于正常现象。白羽肉鸡的生长周期一般在9周以内,该疫苗应用在白羽肉鸡上,一次性免疫即可得到有效的保护。综合多因素考虑,我们暂定鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗的免疫持续期为3个月。
【图文】：

提ＬＰＳ样品含糖量测定：逡逑好的ｌｍＬ粗制ＬＰＳ溶液，加３邋ｍＬ蒽酮试剂混合均匀后，进行冷却，１０邋ｍｉｎ，冷却至室温后，利用分光光度计进行吸光度ＯＤ６２Ｑ测定。逡逑准葡萄糖含量标准曲线的出回归方程＞＝－丨９７也２＋１９０．４４NB－丨丨．丨６（１１２＝０．９８６Ｄ６２0值代入上述回归方程中求得ＬＰＳ糖含量，依据换算情况，，将所得结ＬＰＳ浓度（ｎｇ／ｍＬ）。将确定浓度的粗提ＬＰＳ溶液分装于１５ｍＬ离心用。逡逑作步骤如下表６。逡逑表６邋ＬＰＳ抗原样品含糖量测定操作逡逑Ｔａｂｌｅ邋６邋Ｔｈｅ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｎ邋ｏｆ邋ｓｕｇａｒ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ＬＰＳ邋ａｎｔｉｇｅｎ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑１逦２逦３逦４逦５逦６逦７逦备注逡逑准逡逑液邋０．０５逦０．１０逦０．２０逦０．３０逦０．４０逦０．６０逦０．８０逦置于冰

图３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ鉴定结果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑疫苗检验结果逡逑１）眼观检查：所配制的油佐剂疫苗和铝胶佐剂疫苗外观呈乳白色。逡逑）疫苗稳定性：制备的大肠杆菌油佐剂灭活疫苗，没有分层破乳现象，经３０００邋ｒｐｍ逡逑１５邋ｍｉｎ，疫苗无分层现象。铝胶佐剂灭活苗，４°Ｃ取出后振荡无颜色变化，离心后抗逡逑剂会有分层。逡逑３）疫苗剂型检测结果：将研制的油佐剂疫苗滴于蒸馏水表面，油滴呈规则图形，不逡逑周扩散，证明油乳剂为油包水型。逡逑）不同佐剂灭活疫苗的无菌检验：检验结果表明，三种灭活疫苗的无菌检验均符合逡逑。逡逑不同佐剂灭活疫苗的安全性比较结果逡逑由下表可知，单剂量０．５邋ｍＬ／羽免疫１４日龄健康ＳＰＦ鸡，观察两周。通过临床观察，逡逑尔１７０油佐剂疫苗和Ｍａｒｃ５２油佐剂疫苗接种后１２－２４小时之间，部分鸡产生过暂时性逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.61

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;讯快[J];国外医学(微生物学分册);1989年05期

2 H.Shaw Warren ,王佑春;疫苗佐剂的前景[J];微生物学免疫学进展;1989年02期

3 金人一;;疟疾疫苗佐剂能改进rDNA疫苗[J];生物技术通报;1989年01期

4 那君;胡婧雯;杨小茜;胡敏娟;衡宇;路丽明;;细胞因子作为人类疫苗佐剂的研究进展[J];现代免疫学;2016年04期

5 罗燕;谷新利;李星艳;;中药作为疫苗佐剂的研究概况[J];中国兽医杂志;2009年08期

6 王妍,曹淑桂;人用疫苗佐剂的发展和应用[J];中国生物制品学杂志;2005年03期

7 管孝鞠,吴玉章;人用疫苗佐剂的研究现状[J];药学进展;2001年04期

8 成学俭;;蜂胶——一种优质的动物疫苗佐剂[J];中国动物保健;2014年03期

9 刘芳;;疫苗佐剂的安全性评价[J];中国药事;2010年06期

10 王晓娟;廖雪雁;;疫苗佐剂的研究进展[J];微生物学免疫学进展;2008年03期

相关会议论文 前10条

1 韩云飞;李艳辉;田坚;;改性壳聚糖纳米颗粒作为疫苗佐剂的研究[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第十一分会：应用化学[C];2016年

2 王陈芸;乌美妮;胡凝珠;;新型疫苗佐剂——硫酸软骨素B免疫增强效果的研究[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年

3 王玉霞;朱婷;李倩;麻浩;李海霞;巫亚俊;单俊杰;;板蓝根阿拉伯半乳聚糖的理化性质及疫苗佐剂活性研究[A];全国第二届海洋与陆地多糖多肽及天然创新药物研发学术会议论文集[C];2015年

4 马光辉;;pH敏感型生物可降解高分子纳微球的制备及其作为疫苗佐剂的应用研究[A];2016年全国高分子材料科学与工程研讨会论文摘要集[C];2016年

5 费迎明;王华钧;钟建平;李水法;裘剑飞;周建康;沈华江;汤佳良;黄志荣;祝桂琅;;粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子作乙型肝炎疫苗佐剂增加抗-HBs应答率的研究[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

6 孟北乾;徐明恺;张国俊;张惠文;张成刚;;疫苗佐剂与TLR的关系及其未来的发展趋势[A];第五届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集[C];2015年

7 魏超;;一种新型有效的疫苗佐剂能够通过提高功能性抗体水平与CD4+T细胞分化能力来抵御金黄色葡萄球菌系统性感染[A];第十届全国免疫学学术大会汇编[C];2015年

8 张天笑;王秀利;袁野;;DNA疫苗佐剂研究进展[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年

9 景志忠;蒙学莲;房永祥;窦永喜;陈国华;才学鹏;;CpG DNA重组质粒作为疫苗佐剂的生物安全性评价[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

10 单俊杰;姜威;朱婷;王玉霞;;多糖佐剂在疫苗中的应用[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年

相关重要报纸文章 前5条

1 本报记者 李蕴明;不容忽视 疫苗佐剂标准应时推进[N];医药经济报;2019年

2 新金融记者 盛长琳;周立桥 让世界用上中国疫苗佐剂[N];新金融观察;2018年

3 张国强 蒋建林 张立昌 余平良;疫苗佐剂最新研究进展[N];中国畜牧水产报;2001年

4 本报记者 章勇;顶尖机构锁定疫苗佐剂 潜在空间有待开掘[N];中国畜牧兽医报;2015年

5 韩长芝　杨昊曦 记者 初霞;为家乡发展引资引智[N];哈尔滨日报;2009年

相关博士学位论文 前6条

1 李鑫;CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性脱氧寡核苷酸的疫苗佐剂效应[D];吉林大学;2018年

2 张威风;粒径均一聚乳酸基微球作为亚单位疫苗佐剂的研究[D];中国科学院研究生院(过程工程研究所);2015年

3 钟石根;血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的研究[D];南京医科大学;2002年

4 侯爵;HIV-1 DNA疫苗佐剂及两种病毒载体基因表达谱研究[D];中国疾病预防控制中心;2013年

5 魏宁宁;基于分子模拟的激发态二氢键性质及药物设计[D];大连理工大学;2013年

6 李平利;硫酸化可德兰多糖的制备、体外免疫调节、抗乙肝病毒感染活性及体内用作乙肝疫苗佐剂研究[D];山东大学;2014年

相关硕士学位论文 前10条

1 邵启文;鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选及免疫持续期的初步研究[D];扬州大学;2019年

2 林雅华;磷酸钙纳米颗粒作为疫苗佐剂的应用与机制研究[D];厦门大学;2018年

3 赵凯悦;壳聚糖凝胶微球作为疫苗佐剂及其干燥工艺的研究[D];佳木斯大学;2018年

4 罗启慧;猪IL-4和IL-6基因的克隆、表达及疫苗佐剂效应研究[D];西北农林科技大学;2005年

5 董璐;猪支原体肺炎灭活疫苗及活疫苗佐剂研究[D];山西农业大学;2013年

6 罗婷;新型疫苗佐剂甲磺酸去铁胺及硫氢化钠佐剂效应研究[D];北京协和医学院;2014年

7 陶里;新型疫苗佐剂氢氧化锌增强甲型肝炎抗原免疫效果的研究[D];中国协和医科大学;2008年

8 刘颖;不同疫苗佐剂对OVA诱生CTL免疫应答的影响[D];西北农林科技大学;2011年

9 孙红岩;多肽纳米材料NME、2F在HIV疫苗佐剂及检测中的应用[D];天津科技大学;2017年

10 王越;新型疫苗佐剂胞外UTP、UDP及甘露寡糖佐剂效应研究[D];北京协和医学院;2013年

本文编号：2609434