沙葱总黄酮对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞抗炎作用的研究

发布时间：2020-03-31 22:56

【摘要】：本论文以体外培养LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞为应激模型,研究添加不同浓度的沙葱总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞中炎症介质、细胞因子含量、相关基因表达以及NF-κB信号通路的影响,以期探讨沙葱总黄酮对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症的保护作用和抗炎作用。本论文由4个试验组成:试验1沙葱总黄酮最佳添加浓度的筛选。应用CCK-8法筛选沙葱总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞活力具有促进作用的浓度,结果显示,与对照组相比,沙葱总黄酮浓度在12.5~200μg/mL范围内均能提高小鼠腹腔巨噬细胞活力。当添加沙葱总黄酮浓度为200μg/mL时细胞增值率呈现下降趋势,故本论文后续试验中,将沙葱总黄酮的添加浓度确定为25~100μg/mL。试验2沙葱总黄酮对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中相关炎症因子的影响。设置对照组、LPS应激模型组(1μg/mL LPS)、不同浓度沙葱总黄酮预处理+LPS组(25、50、100μg/mL沙葱总黄酮预处理细胞1h后加入1μg/mL LPS共同处理细胞),培养24h后,用Griess法检测沙葱总黄酮对模型细胞NO生成量的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10含量。结果表明,沙葱总黄酮能极显著降低LPS诱导的小鼠腹腔巨噬炎症细胞产生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量(p0.01)及提高了IL-10的含量(p0.01)。试验3沙葱总黄酮对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中相关炎症因子基因表达量的影响。试验分组同试验2,培养时间为4~12h。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、iNOS COX-2 mRNA表达量。结果表明,与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮能显著降低LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞内iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2等炎症因子的基因表达量,同时能显著提高IL-10的基因表达量。试验4沙葱总黄酮对NF-κB信号通路的影响。试验设计同试验3,培养时间为4~12h,用RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞中Myd88、NF-κB的表达量。试验结果表明,与LPS应激模型组相比,沙葱总黄酮组在培养4h时能够极显著降低(p0.01)NF-κB、Myd88基因mRNA表达量,但随着培养时间的延长NF-κB、Myd88基因mRNA表达量虽然降低,但与LPS应激组相比差异不显著(p0.05)。综上所述,适宜浓度的沙葱总黄酮对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞能直接抑制细胞因子含量及基因表达量,可能机制是通过抑制NF-κB信号通路来实现其抗炎作用。抑制促炎性细胞因子基因的表达。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S853.7

【参考文献】

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本文编号：2609684