半胱氨酸、蛋氨酸和褪黑激素对内蒙古绒山羊成纤维细胞增殖调控作用的研究

发布时间：2020-04-01 21:43

【摘要】：本研究以内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞为研究对象,探讨蛋氨酸、半胱氨酸和褪黑激素对细胞增殖、角蛋白以及相关基因mRNA表达的影响,进一步探索能量和营养感应分子AMPK-mTOR通路的变化规律。本论文试验研究分为五部分。试验一利用组织块贴壁法对内蒙古绒山羊耳尖皮肤进行体外培养。对其进行观察、纯化以及鉴定,并绘制生长曲线。实验二向生长期的成纤维细胞中添加半胱氨酸和蛋氨酸,研究了不同浓度的Cys和Met(1X=0.12 mM、5X=0.6 mM、10X=1.2 mM、20X=2.4 mM)对成纤维细胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信号通路相关基因mRNA表达量的影响。试验三向成纤维细胞中添加不同比例的Cys和Met(1:1、1:3、1:5、3:1、5:1),研究了不同比例的两种氨基酸对成纤维细胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信号通路相关基因mRNA表达量的影响。试验四向成纤维细胞中添加褪黑激素,研究了不同浓度的MeL(0、100、300、500、700pg/m L)对成纤维细胞增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信号通路相关基因mRNA表达量的影响。试验五在试验三和试验四的基础上选取对成纤维细胞增殖作用较强的浓度1:1、3:1、500pg/ml、700pg/ml组进行混合添加,研究了混合添加组对成纤维细胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信号通路相关基因mRNA表达量的影响。本试验研究初步得到以下结果:(1)对培养好的细胞进行形态观察,发现细胞呈长梭型,为典型的成纤维细胞形态;并进行细胞计数和绘制细胞生长曲线,呈典型的“S”型。(2)与对照组相比,添加不同浓度的Cys可以显著促进成纤维细胞的增殖(P0.05),在5X浓度组为最好。可以显著上调PCNA、K10、K14、K15、P53、P21、BMP4、TGFβ、IVLmTOR等基因mRNA表达量;添加不同浓度的蛋氨酸可显著抑制成纤维细胞的增殖,而显著提高PCNA、CCND1、K14、K15,P21,BMP4、TGFβ、mTOR 的 mRNA 表达量;(3)与对照组相比,添加不同浓度的两种氨基酸均可显著促进成纤维细胞的增殖(P0.05)。当半胱氨酸的浓度不变,蛋氨酸的浓度逐渐升高时,细胞增殖率在1:1组为最高,随后逐渐降低。添加不同浓度的两种氨基酸可以显著提高细胞PCNA、CCND1、CDC42、K15、P53、LOR、IVL、TGF、mTOR mRNA 的表达量。当蛋氨酸的浓度不变,半胱氨酸的浓度逐渐升高时,细胞增殖率在3:1时细胞增殖率达到最高,可以显著提高基因 PCNA、CDC42、K14、K15、P53、IVL、TGFβ mRNA 表达量;(4)与对照组相比,添加MeL可以显著促进内蒙古绒山羊成纤维细胞的增殖(P0.05)。在浓度为10 pg/ml组的相对增殖率为最低,在浓度为500pg/ml组的相对增殖率达到最高。单一添加MeL可以显著提高相关基因CCND1、K14、K15、P53、BMP4、LOR、mTOR、P53mRNA 的表达量。(5)与对照组相比,混合添加组均可显著促进成纤维细胞的增殖(P0.05)。在1:1+500pg/ml组的相对增殖率达到最高,在1:1+700pg/m L组达到最低。混合添加组还可以显著提高相关基因PCNA、K14、mTOR mRNA的表达量。
【图文】：

图１表皮的超微结构逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ邋ｕｌｔｒａｓｔｎｉｃｔｕｒｅ逡逑

图２毛囊的结构逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｈａｉｒ邋ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ逡逑
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S827.5

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 杨梦洁;林蕾;高晶;;毛囊发育和循环生长的信号机制的研究进展[J];现代实用医学;2014年06期

2 王琳;蔡婷;俎红丽;欧阳效晴;赵艳红;;毛囊形态发生和周期性变化相关信号因子在绒山羊中的研究进展[J];中国畜牧兽医;2013年11期

3 王宁;荣恩光;闫晓红;;毛囊发育与毛发生产研究进展[J];东北农业大学学报;2012年09期

4 薛科邦;;绒山羊硫营养研究进展[J];甘肃畜牧兽医;2012年03期

5 李玉荣;范文斌;李长青;尹俊;张燕军;李金泉;;内蒙古绒山羊次级毛囊组织形态周期性变化研究[J];中国农业科学;2008年11期

6 王宏博;高雅琴;;绒山羊皮肤毛囊结构及其与产绒量关系的研究进展[J];安徽农业科学;2008年29期

7 王宏博;高雅琴;;影响绒山羊产绒性能和绒毛品质的因素及其研究进展[J];中国草食动物;2007年04期

8 张燕军;尹俊;李金泉;李长青;;内蒙古阿尔巴斯绒山羊毛囊结构及形态发生过程研究[J];中国农业科学;2007年05期

9 耿忠诚,邵伟,袁子国,靳锐,刘丽丽,潘振亮,胡海燕,陈建华;不同蛋氨酸水平对长毛兔产毛性能和血液生化指标的影响[J];中国养兔;2005年05期

10 李长青,尹俊,张燕军,郭志成,张文广,高爱琴,李玉荣,赖双英,李金泉;内蒙古绒山羊与辽宁绒山羊皮肤毛囊周期性变化的比较研究[J];畜牧兽医学报;2005年07期

相关博士学位论文 前9条

1 奈日乐;内蒙古绒山羊皮肤毛囊周期性生长及波形蛋白的作用机制研究[D];内蒙古农业大学;2018年

2 孙菲菲;胆碱和蛋氨酸对奶牛围产期营养平衡和机体健康的影响及机制[D];西北农林科技大学;2017年

3 马巍;NGF在绒山羊皮肤组织中的表达及其对次级毛囊外根鞘细胞增殖作用的研究[D];吉林农业大学;2017年

4 高晔;陕北白绒山羊皮肤毛囊发育早期的转录组学分析及VDR基因的功能研究[D];西北农林科技大学;2017年

5 段春辉;褪黑激素调控山羊绒生长的模式及机理初探[D];中国农业大学;2016年

6 朱兵;内蒙古绒山羊皮肤毛囊毛乳头细胞系的建立及其基因表达谱型的研究[D];内蒙古大学;2014年

7 李树伟;影响绵羊毛纤维与毛囊结构及生产性状的分子机理研究[D];吉林大学;2008年

8 李玉荣;内蒙古绒山羊不同时期皮肤中相关基因差异表达及原位杂交的研究[D];内蒙古农业大学;2008年

9 王林枫;光照和埋植褪黑激素对内蒙古白绒山羊含氮物质分配和产绒性能的影响及调控的研究[D];内蒙古农业大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 要乐;绒山羊胎儿成纤维细胞ERK功能抑制的转录组分析及其在脂合成中的作用[D];内蒙古大学;2018年

2 王志敏;阿尔巴斯绒山羊胎儿成纤维细胞和成体干细胞的体外生长特性及表观遗传修饰模式的比较[D];内蒙古大学;2018年

3 刘逍;蛋氨酸对吉林白鹅胚胎后期-28日龄皮肤毛囊发育及调控的影响[D];吉林农业大学;2017年

4 曹春花;褪黑素刺激对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和分化的影响及机理研究[D];内蒙古农业大学;2016年

5 王珊珊;葡萄糖和氨基酸应激对奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白及信号通路相关蛋白磷酸化表达的影响[D];内蒙古农业大学;2016年

6 吴静;褪黑激素对内蒙古绒山羊产绒性能及皮肤毛囊中RORa表达的影响[D];内蒙古农业大学;2016年

7 南韦肖;蛋氨酸对体外培养的水貂毛囊及毛乳头细胞发育规律的影响[D];吉林农业大学;2016年

8 代文婷;亮氨酸对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成影响和机理研究[D];吉林大学;2015年

9 张霞;GSK3β通过mTOR/S6K1途径对奶牛乳腺上皮细胞泌乳及增殖的调控[D];东北农业大学;2014年

10 舒国涛;辽宁绒山羊次级毛囊年周期变化规律及其相关生物钟基因研究[D];中国农业科学院;2014年

，

本文编号：2610979