虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响
发布时间：2020-04-06 15:00
【摘要】：牛卵母细胞体外成熟是体外获得牛胚胎的重要一步,而体外成熟环境因素(如活性氧)制约着牛卵母细胞成熟的质量。虎杖苷(Polydatin,PD)是植物虎杖的提取物,也称为白藜芦醇苷,是白藜芦醇与葡萄糖的结合物。虎杖苷具有抗氧化能力和保护线粒体的作用。目前,虎杖苷对卵母细胞体外成熟的研究鲜有报道。本研究探讨了虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响,为进一步优化卵母细胞体外成熟培养体系提供一定的理论基础。具体研究结果如下:1.探讨了不同浓度的虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟影响。在牛卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度(0、0.5、1.0、2.0μumol/L)的PD,观察牛卵母细胞成熟效果。结果发现,与对照组(0 μmol/L)相比,各处理组(0.5、1.0、2.0μumol/L)PD显著提高第一极体率(P0.05)。将各组卵母细胞进行体外受精(IVF),结果显示,胚胎分裂率差异不显著(P0.05),而1.0 μmol/LPD处理组与对照组相比囊胚率显著提高(32.17±2.50%vs 24.01±2.27%,P0.05)。与对照组相比,1.0、2.0 μmol/LPD处理组显著增加了囊胚期的细胞数(101.5±3.41%vs 94.7士1.78%,100.67±0.57%vs 94.7±1.78%,P0.05),以上结果显示,1.0μmol/LPD为添加到成熟液的最佳浓度。2.探讨了虎杖苷提高牛卵母细胞体外成熟质量的作用机制。(1)1.0μumol/L PD显著降低了牛成熟卵母细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平(29.95±1.53 vs 35.18±1.01,p0.05)(2)荧光定量结果显示,1.00μmol/LPD显著提高了卵母细胞内GPX4、SOD1基因的表达水平(P0.01)。(3)1.0 μmol/LPD显著提高卵母细胞内总谷胱甘肽的量(3.365±0.21 vs 2.172±0.14 pmol/oocyte,P0.01)。3.探讨了虎杖苷对牛卵母细胞线粒体的影响。(1)1.0 μmol/LPD显著提高了牛成熟卵母细胞线粒体均匀分布率(70.39±0.34%vs 63.32±0.28%,P0.01)。(2)1.00μmol/LPD显著提高了牛成熟卵母细胞内ATP水平(0.4793±0.037μmol/L vs 0.3603±0.032 μmol/L,P0.05)。(3)1.0 μmol/L PD处理组与对照组卵母细胞线粒体膜电位没有显著差异(2.075±0.10 vs 1.675±0.16),(P0.05)。(4)荧光定量结果显示,1.00μmol/LPD 显著提高SIRT1、TFAM、PGC-1α基因的表达水平(P0.01)。以上结果表明,在体外成熟培养液中添加1.0 μmol/L虎杖苷有利于牛卵母细胞的体外成熟效果及其随后早期胚胎的发育。1.0 μuml/L虎杖苷降低细胞内的ROS水平,提高了细胞内的抗氧化能力,增强了线粒体的功能,从而促进卵母细胞体外成熟的质量。
【图文】：
用ＩｍａｇｅＪ软件分析绿色荧光密度，荧光密度大小表示荧光的强弱并进行统逡逑计分析。结果发现，，１．０邋ｐｍｏｌ／ＬＰＤ处理组与对照组相比ＲＯＳ水平显著降低（２９．９５邋土邋１．５３逡逑ＶＳ３５．１８±１．０１，Ｐ＜０．０５），说明虎杖苷能显著降低细胞内的ＲＯＳ水平（图２－２，图２－３）。逡逑图２－２牛卵母细胞ＲＯＳ染色荧光图（ｌ0ｘ）逡逑注：ａ．对照组（Ｏｐｍｏｌ／ＬＰＤ）邋ｂ．处理组（１．０邋ｊｉｍｏｌ／Ｌ邋ＰＤ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｏｏｃｙｔｅ邋ＲＯＳ邋（１邋0ｘ邋）逡逑Ｎｏｔｅ：邋ａ．邋Ｔｈｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ（０邋＾ｉｍｏｌ／Ｌ邋ＰＤ）邋ｂ．邋Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐ（１．０邋｜ｉｍｏｌ／ＬＰＤ）逡逑２６逡逑
逦ｂ逡逑Ｉｔ逡逑０逦１．０邋／ｊｍｏｌ／ＬＰＤ逡逑图２－３体外成熟牛卵母细胞ＲＯＳ的含量逡逑注：同一图不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜0．0５），下同。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋ＲＯＳ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｏｆ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｏｏｃｙｔｅ邋ｉｎ邋ｖｉｔｒｏ邋ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ逡逑Ｎｏｔｅ：邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｌｏｗｅｒｃａｓｅ邋ｌｅｔｔｅｒｓ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｆｉｇｕｒｅ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｂｅｌｏｗ逡逑２．５虎杖苷对牛卵母细胞抗氧化基因ＧＰＸ４，邋ＳＯＤ／基因表达水平的影响逡逑为了进一步探讨成熟液添加ＰＤ对卵母细胞抗氧化能力的影响。荧光定量ＰＣＲ测定逡逑细胞内抗氧化基因Ｇ／ＩＷ，ＳＯＤ７的表达水平。结果发现：与对照组相比，ｌ．Ｏｐｍｏｌ／ＬＰＤ逡逑处理组卵母细胞抗氧化基因ＧＰＫ邋ＳＯＺ）／的表达水平有了显著提高（图２－４，邋ＰＯ．０１）。逡逑ＧＰＸ４逦Ｓ０Ｄ１逡逑ｓ，４ｌ邋＾逦Ａ逦４邋’逦Ａ逡逑！：N襄巍觥鲥义匣峤镥危龋儒危忮危慑义希洛巍鲥义希板危保板澹椋恚铮欤蹋校腻危板危保埃辏恚铮欤蹋校腻义贤迹玻矗禾逋獬墒炫Ｂ涯赶赴寡趸颍牵椋欤祝蔚谋泶锼藉义献ⅲ和煌疾煌笮醋帜副硎静钜旒灾ǎ校迹埃埃保
本文编号：2616666
【图文】：
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