以POD和Hb双靶标检测鉴别死宰猪肉方法建立

发布时间：2020-04-11 12:26

【摘要】：我国现行的死宰猪肉鉴别方法主要是感官检验和定性检测,其结果均不能提供准确和定量化数据,难以形成可靠的死宰猪肉鉴别标准。本研究以死宰猪肉为研究对象,通过建立猪血红蛋白(Hemoglobin,Hb)酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,构建了以猪肉中过氧化物酶(Peroxidase,POD)和Hb为双检测靶标的死宰猪肉鉴别方法。本研究主要内容如下:1.猪Hb单克隆抗体的制备及ELISA建立。以猪Hb为抗原,免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,经4次亚克隆及筛选,获得11株可稳定分泌单克隆抗体的杂交细胞瘤株,经Western Blot鉴定11株单抗均具有良好的特异性;其中4株(G、H、Z4、Z5)单克隆抗体效价为6.4×10~5;利用单抗Z4为包被抗体,单抗G为酶标抗体,建立了猪肉Hb双抗体夹心ELISA检测方法。2.几种死宰猪肉鉴别方法的研究分析。肉样经手剪法和机搅法处理后,通过测定死宰猪肉相关指标pH、POD、Hb,研究4种方法的准确性,结果表明,机搅法处理的肉样检测结果优于手剪法;其中POD检测法和血红蛋白ELISA检测法的符合率高于另外两种方法,然而单一的检测方法均不能作为鉴别死宰猪肉的判定标准。3.以POD和Hb双靶标检测鉴别死宰猪肉方法的建立。确定了肉浸液10倍稀释、浸泡10 min为样本最佳前处理条件,建立了以猪肉POD和Hb浓度为双检测靶标的鉴别死宰猪肉方法,鉴别准确率可达到95.5%;研究分析符合率,确定了死宰猪肉和健康猪肉的判定标准R值,即R≤300时为健康猪肉,R≥400时为死宰猪肉。综上所述,本研究建立猪血红蛋白ELISA检测方法,构建了以猪肉POD和Hb为双检测靶标的死宰猪肉鉴别方法,为临床死宰猪肉鉴别提供理论依据和技术支持。
【图文】：

表 2-7 猪血红蛋白单克隆抗体亚类测定Table.2-7 Determination of porcine hemoglobin monoclonal antibody subclass序号 名称 重链 轻链1# 1H9-F11-A3 IgG2a Kappa2# 1A12-F4-B10-H7 IgG2a Kappa3# 3B10-G3-E11-A7 IgG1 Kappa4# 3B8-C12-H3-H10 IgG1 Kappa5# 3B8-A8-D5-A4 IgG1 Kappa6# 4D8-H1-A7-G2-A1 IgG1 Kappa7# 4D8-E3-H3-A10-H8 IgG1 Kappa8# 4H6-G8-D6-B2-B4 IgG1 Kappa9# 4H6-H9-G12-G5-G9 IgG1 Kappa10# 4F6-F6-G8-H12 IgG1 Kappa11# 4F6-F5-A10-H12 IgG1 Kappa2.3.5 Western Blot 鉴定单克隆抗体Western Blot 检测结果显示，，筛选出的 11 株抗猪血红蛋白单克隆抗体猪血红蛋白发生特异性结合反应，结果表明 11 株单抗均有较好的特异性（图25kD
【学位授予单位】：河北工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S851.43

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本文编号：2623593