新城疫病毒M蛋白K119和K260泛素化修饰有助于病毒样颗粒的形成
发布时间：2020-04-15 10:50
【摘要】：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染禽引起的高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征,具有很高的发病率和病死率,对养禽业造成巨大的危害。NDV为单股负链RNA病毒,属于单负链病毒目(Mononegavirales)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽副粘病毒属(Avulavirus)。泛素化修饰对于蛋白的亚细胞定位、结构和功能以及降解,都非常重要。有报道表明泛素化修饰帮助副粘病毒M蛋白出核和形成病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP);然而,NDV M蛋白的泛素化修饰以及泛素化修饰在病毒感染周期中的作用尚未得到鉴定。本研究通过共转染和表达NDV Flag-M和HA-Ubiquitin,以免疫沉淀及Western Blot检测,发现M蛋白存在HA-ubiquitin修饰。通过不同副粘病毒M蛋白的序列比对以及在线软件预测分析,推测M蛋白的潜在的泛素化位点为保守赖氨酸K83、K119、K158、K222、K248和K260。通过定点突变,把相应K位点突变为丙氨酸(A)或精氨酸(R),发现K119A、K222A、K248A、K260A、K119R、K222R、K248R、K260R的泛素化条带有所减少,初步鉴定K119、K222、K248和K260具有泛素化修饰。副粘病毒中,NiV、hPIV、SiV以及NDV等的M蛋白可形成VLP,释放到细胞外。有报道表明NiV和人副粘病毒5型的M蛋白的泛素化修饰,对VLP的形成至关重要。本研究中,我们分别表达野生型M蛋白或泛素化位点突变型M蛋白,检测和比较VLP的产量。结果表明,突变K119和K260为A或者R,降低了VLP的形成和释放。由于M蛋白翻译合成后,先进入细胞核,再出核,迁移至细胞膜,完成病毒的组装和出芽释放。NDV M蛋白K119位于副粘病毒保守的NES序列,而K260位于副粘病毒的NLS序列。为了探讨M蛋白泛素化和M蛋白核输出的关系,我们通过间接免疫荧光检测,发现突变体K119R滞留在细胞膜,而K260R滞留在细胞核,因而影响了VLP的形成。进一步检测K119R和K260R蛋白突变体与宿主蛋白的相互作用,发现跟野生型M蛋白相比较,K119R突变导致跟宿主的互作蛋白增多,揭示K119泛素化可能遮盖了蛋白互作位点,使其能顺利从细胞膜释放。综上所述,NDV M蛋白存在泛素化修饰,且K119和K260泛素化修饰有助于VLP的出芽或释放。
【图文】：
毒 (Human respiratory syncytial virus，HRSV )、仙尼帕病毒 (Nipah virus，NiV )等均属于副黏病毒成癌细胞内发现了一株名为 MTH-68 的 NDV (Csa肿瘤细胞并进行复制，而正常细胞几乎不受影响。L 的细胞中，NDV 能正常复制(Mansour et al., 2011凋亡因子，这使 NDV 成为了一种有效的溶瘤病毒度为 15192 nt，依次编码核衣壳蛋白 (Nucleocaps、基质蛋白(Matrix protein，M )、融合蛋白 (Fusioglutinin-Neuraminidase protein，HN )和大分子蛋白因通过 RNA 编辑产生的两种非结构蛋白：V 蛋白同，新城疫病毒分为：强毒型、中毒型和弱毒型。，可导致高达 90%的死亡率，，例如 Herts/33 株；中约 10%的死亡率，例如 CS2 毒株、Mukteswar 毒株例如 La Sota 株。
抑制 IFN 刺激基因（ISG）的产生(Park, et al., 2003)。是通过 RNA 编辑，在 P 蛋白的 ORF 中插入两个 G 生成，与 V 蛋白有不明确。复制和致病性其表面糖蛋白与细胞表面唾液酸类化合物结合，攻击呼吸道上皮细胞外，感染也可通过受体介导的内吞作用，有时还可通过依赖于腔隙007)。进入宿主细胞后，负链 RNA 基因组转录成正链 mRNA，然后翻 L 蛋白负责转录和复制，也是核衣壳组装的关键成分。然后，以正链 因组 RNA。成熟 NDV 的组装和出芽依赖于 M 蛋白和细胞膜上的脂筏。白前体 F0 被蛋白酶裂解为 F1-F2 亚基。因此，F 蛋白裂解位点被认为anda et al., 2004)。具有病毒受体识别和神经氨酸酶活性的 HN 对 NDV eeuw et al., 2005)。也有研究表明，F和HN是NDV感染巨噬细胞的决定因mer-Oberdorfer et al., 2003)。最新研究表明，F 蛋白裂解位点保守的谷氨重要作用，Q114R 突变可减弱病毒毒力(Samal et al., 2011)。另一项研域能增强 NDV 在鸡体内的复制和致病性(Samal et al., 2013)。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.65
【图文】：
毒 (Human respiratory syncytial virus，HRSV )、仙尼帕病毒 (Nipah virus，NiV )等均属于副黏病毒成癌细胞内发现了一株名为 MTH-68 的 NDV (Csa肿瘤细胞并进行复制，而正常细胞几乎不受影响。L 的细胞中，NDV 能正常复制(Mansour et al., 2011凋亡因子，这使 NDV 成为了一种有效的溶瘤病毒度为 15192 nt，依次编码核衣壳蛋白 (Nucleocaps、基质蛋白(Matrix protein，M )、融合蛋白 (Fusioglutinin-Neuraminidase protein，HN )和大分子蛋白因通过 RNA 编辑产生的两种非结构蛋白：V 蛋白同，新城疫病毒分为：强毒型、中毒型和弱毒型。，可导致高达 90%的死亡率，，例如 Herts/33 株；中约 10%的死亡率，例如 CS2 毒株、Mukteswar 毒株例如 La Sota 株。
抑制 IFN 刺激基因（ISG）的产生(Park, et al., 2003)。是通过 RNA 编辑，在 P 蛋白的 ORF 中插入两个 G 生成，与 V 蛋白有不明确。复制和致病性其表面糖蛋白与细胞表面唾液酸类化合物结合，攻击呼吸道上皮细胞外，感染也可通过受体介导的内吞作用，有时还可通过依赖于腔隙007)。进入宿主细胞后，负链 RNA 基因组转录成正链 mRNA，然后翻 L 蛋白负责转录和复制，也是核衣壳组装的关键成分。然后，以正链 因组 RNA。成熟 NDV 的组装和出芽依赖于 M 蛋白和细胞膜上的脂筏。白前体 F0 被蛋白酶裂解为 F1-F2 亚基。因此，F 蛋白裂解位点被认为anda et al., 2004)。具有病毒受体识别和神经氨酸酶活性的 HN 对 NDV eeuw et al., 2005)。也有研究表明，F和HN是NDV感染巨噬细胞的决定因mer-Oberdorfer et al., 2003)。最新研究表明，F 蛋白裂解位点保守的谷氨重要作用，Q114R 突变可减弱病毒毒力(Samal et al., 2011)。另一项研域能增强 NDV 在鸡体内的复制和致病性(Samal et al., 2013)。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.65
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9 唐时s
本文编号：2628469
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