鸡传染性支气管炎疫苗免疫后IHA抗体与HI抗体的比较研究

发布时间：2020-04-15 02:09

【摘要】：鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种仅发生于鸡的急性、高度接触性的呼吸道疾病。该病在我国的流行趋势逐步上升,尤其是肾病变型IB已蔓延至全国各地,造成了严重的经济损失。目前用于评价鸡传染性支气管炎疫苗免疫效果的抗体检测方法主要是血凝抑制试验(HI)。HI试验所用的血凝素(HA)抗原需用胰蛋白酶或磷脂酶C处理制备,这一过程破坏IBV的纤突蛋白,不能真实反映IBV抗体水平。此外,IBV的血清型众多,各血清型之间的差异很大,因此,使用HI试验评价不同血清型IBV疫苗免疫后的抗体水平受到了质疑。本研究旨在建立将IBV全病毒吸附于鸡红细胞载体上的间接血凝试验(IHA)方法,并通过与HI比较特异性、敏感性,检测W93和M41抗原的交叉关系及田间免疫血清抗体水平来确定IHA抗体与HI抗体之间的差异。通过使用建立的IHA方法和HI方法来检测IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株灭活苗免疫后鸡血清中抗体水平,阐明不同血清型疫苗免疫鸡群IHA抗体与HI抗体的变化规律。试验结果如下:1.建立了检测血清中IBV抗体的IHA方法。将IBV不同毒株接种10日龄非免疫鸡胚,48 h后收获尿囊液,经0.2%甲醛灭活后获得IBV灭活病毒液。IHA抗原制备是将IBV灭活病毒液与2.5%鞣酸鞣化的鸡红细胞按1:2混匀,致敏1 h,检测IBV阳性血清的IHA效价可达2~8。HA抗原制备是用IBV灭活病毒液经1%胰酶处理制成,胰酶与抗原最佳比例为1:3,处理抗原的最佳时间是2 h,检测IBV阳性血清的血凝价(HA)可达2~8-2~9。2.建立的IHA方法和HI方法均具有实用性。用建立的IHA方法和HI方法分别检测IBV的W93株阳性血清、M41株阳性血清及IBV阴性血清,禽流感(AI)H9、禽流感(AI)H5、新城疫(ND)、传染性法氏囊病(IBD)、产蛋下降综合征(EDS-76)等病毒性的阳性血清。结果表明,用IBV的W93和M41毒株制备的抗原建立的IHA和HI方法特异性良好。分别用IHA和HI方法检测10份免疫鸡血清,结果显示IHA效价在2~6~2~8,HI的效价在2~8~2~9,表明HI效价比IHA方法高2~4倍。用W93和M41制成的IHA抗原和HA抗原对6份疫苗免疫鸡血清分别进行IHA和HI抗体检测,IBV的W93株和M41株的HI结果完全一致,而IHA试验结果存在1~2倍抗体滴度的差异。3.IBV不同疫苗免疫鸡群中IHA和HI抗体消长规律存在差异。用IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株灭活苗分别免疫健康雏鸡,免疫后不同时间(7、14、21、28、35、42 d)采血分离血清,用IHA和HI试验检测免疫鸡血清抗体的消长规律。结果显示W93和M41活疫苗免疫后抗体维持时间短,峰值不高,而M41株灭活苗免疫后,抗体水平峰值虽然不高,但维持时间较长。总体而言,虽然IHA和HI均可用于鸡传染性支气管炎疫苗免疫后的效果评价,但HI试验检测抗体个体差异小,IHA试验检测抗体个体差异较大。
【图文】：

病毒粒子,结构示意图

IBV病毒粒子结构示意图

示意图,间接血凝试验,分子生物学技术,原理

图 1-2 间接血凝试验原理示意图(曹旭 2004)Fig.1-2 Principle of indirect hemagglutination test (Cao Xu 2004)1.5.3 分子生物学技术分子生物学技术在疾病诊断中有着突出优点，其灵敏性高、特异性强、耗时短
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.31

【参考文献】