精氨酸和维拉帕米对孕鼠子宫和胎鼠的影响

发布时间：2020-04-23 11:09

【摘要】：精氨酸(L-Arg)是哺乳动物必需或条件性必需氨基酸,在胚胎发育中起着关键作用,且L-Arg幼龄动物体内是以必需氨基酸的功能存在的,具有重要的生物机体内调节功能。众所周知,动物在妊娠过程中,生理上发生改变,如血液粘稠度增加、血压升高、某些凝血因子增加致血液呈高凝状态等血液流变学改变以及机体免疫力降低等。L-Arg能够扩张血管,并且能明显增加子宫胎盘血流量、改善血浆粘度和提升红细胞数量及变形能力,从而优化胚胎生长发育环境,而Ca~(2+)在其代谢调控中发挥重要作用。Ca~(2+)作为机体的第二信使,并且是各项生命活动中必不可少的物质,如参与神经传导、胚胎的着床与发育、能量的传递以及基因的表达调控等,在胚胎正常发育中起着重要作用。维拉帕米作为常规的Ca~(2+)阻滞剂能够高效地抑制胞外Ca~(2+)内流,从而降低胞内Ca~(2+)浓度,因此在确定精氨酸能够有效缓解IUGR(intrauterine growth retardation,宫内发育迟缓)的基础上探究Ca~(2+)在此过程中的影响机制,本试验通过在添加最适浓度精氨酸的前提下补充添加维拉帕米作为实验对照研究胚胎的发育情况,并通过测定不同发育日龄胚胎的体重、相对应胎盘重以及母鼠子宫重来判断L-Arg和维拉帕米对胚胎IUGR的影响、运用常规石蜡切片进行巨噬细胞和肥大细胞(MC)的观察计数、运用免疫组化方法对微血管内皮细胞和钙调蛋白阳性细胞进行观察计数、酶联免疫吸附法(ELISA)探究钙依赖型一氧化氮合酶(e NOE和n NOS)的变化量、原位杂交方法探究m RNA的表达量等试验方案,来阐述Ca~(2+)在缓解IUGR中的作用并筛选出最优化结合蛋白。研究结果如下:1、精氨酸组胎鼠数量、胎鼠存活率、胎鼠体重、母鼠子宫重等IUGR指标显著高于对照组(P0.05),维拉帕米组显著降低(P0.05)或极显著低于精氨酸组(P0.01)。2、精氨酸组子宫MC数显著(P0.05)或极显著(P0.01)低于对照组及维拉帕米组;精氨酸组子宫巨噬细胞数较对照组显著(P0.05)增多,维拉帕米组对对照组显著(P0.05)减少,精氨酸组与维拉帕米组差异极显著(P0.01);精氨酸组子宫微血管(MVD)数对照组显著增多(P0.05)维拉帕米组显著(P0.05)减少。3、L-Arg能够使子宫胎盘中Ca~(2+)依赖型e NOS和n NOS的含量整体趋势增多(P0.05),而添加维拉帕米后会使e NOS和n NOS的含量整体趋势减少(P0.05),但在不同的日龄中会存在小幅度的波动性,且胎盘中e NOS和n NOS的含量显著低于子宫中(P0.05)。4、对五种优化Ca~(2+)结合蛋白运用免疫组化分析筛选,测定阳性细胞表达量以及变化率从而筛选出最优结合蛋白,由高到低的顺序依次为:钙调蛋白(Ca M)、钙磷脂结合蛋白AnnexinⅡ、蛋白激酶C(PKC)、钙调神经磷酸酶(Ca N)、Orail。并针对最优选蛋白Ca M进行基因表达测定,发现维拉帕米组m RNA表达量显著低于对照组(P0.05)或极显著低于精氨酸组(P0.01)。综上所述:精氨酸能够从提高母畜产子数和增强子宫重、提高胎鼠重量、减少胎鼠死亡率等方面增强母畜的繁殖能力,并且能够增加巨噬细胞和微血管内皮细胞数量、增强子宫胎盘中e NOS和n NOS的含量以及增强Ca~(2+)结合蛋白及基因的表达,而维拉帕米能够抑制这种促进作用,表明Ca~(2+)在妊娠期胎儿正常生长发育中起着关键性作用。
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S816;S814

【参考文献】