羊蜱蝇的分子生物学鉴定及其携带部分病原检测
发布时间：2020-04-23 18:32
【摘要】：羊蜱蝇是一种以绵羊为主要寄生宿主的体外寄生虫,当其寄生于绵羊时,会引起宿主贫血、消瘦以及羊毛,羊皮质量和产量下降,造成直接的经济损失。此外,羊蜱蝇还可以传播或贮存巴尔通体、绵羊无浆体和立克次体等多种病原,对畜牧养殖业和人的健康造成威胁,引起间接的经济损失。本试验从阿克苏地区库车县、克州阿克陶县、阿勒泰青河县和甘肃武威市共采集羊蜱蝇731只,并从4个地点所采集的羊蜱蝇中分别挑选出形态完整的样品88只(含13个蛹)、5只、5只和10只,共计108只样品,通过形态学特征观察初步确定为羊蜱蝇,随后进行12S rDNA、16S rDNA和18S rDNA基因的扩增。进一步对巴尔通体gltA、杀雄菌16S rDNA、无浆体属msp4、绵羊无浆体GroEL、立克次体ompA以及立克次体17KDa等基因进行PCR扩增,阳性产物进行测序,对试验得到所有序列进行Blast在线分析,并从GenBank数据库中下载相应基因序列,利用MEGA5.0软件进行同源性和系统进化分析,以确定病原的种类。结果表明,羊蜱蝇12S rDNA序列与云南2016年提交的羊蜱蝇序列同源性为100%;羊蜱蝇16S rDNA序列与丹麦2007年、捷克和新疆2017年提交的羊蜱蝇序列同源性均为99%;羊蜱蝇18S rDNA序列与新疆2016年提交的羊蜱蝇序列同源性为99%。病原检测的结果如下:巴尔通体gltA基因阳性率为95%(103/108),与已知Bartonella melophagus gltA的同源性介于99.3%~100%;杀雄菌16S rDNA基因阳性率为6.4%(5/78,5份DNA来源均为羊蜱蝇蛹),与已知羊蜱蝇体内检测到的杀雄菌16S rDNA的同源性为100%;无浆体属msp4基因阳性率为39%(42/108,其中5份DNA样品来源为羊蜱蝇蛹),与已知绵羊无浆体msp4序列同源性介于99.3%~99.8%;绵羊无浆体GroEL基因的阳性率为50%(39/78),与已知绵羊无浆体GroEL序列同源性介于99.1%~100%;立克次体ompA和基因17KDa的阳性率均为9%(10/108),与已知R.raoultii序列的同源性分别为99.4%~100%和99.7%~100%;沃尔巴克体16S rDNA基因的阳性率为94%(102/108),与多种宿主体内检测到的沃尔巴克体的同源性为99.6%~100%,进一步分析,确定为F超群沃尔巴克体。阿克苏地区库车县、克州阿克陶县、阿勒泰青河县和甘肃武威市存在主要寄生于绵羊的体外寄生虫——羊蜱蝇,其体内携带多种病原微生物,提示畜牧业应防范羊蜱蝇可能带来的危害,从而减少直接或间接的经济损失。
【图文】：
a：雌性羊蜱蝇腹面 4x；b：雄性羊蜱蝇腹面 4x；c：羊蜱蝇的蛹 40x图 2-1 羊蜱蝇体视显微镜观察结果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 扩增及测序对形态学鉴定为羊蜱蝇的样本（n=108）进行 DNA 提取，用 PCR 的方法进行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的扩增，PCR 产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测均得到目的条带，与预期片段大小一致，电泳图见图 2-2。试验所得 PCR 阳性产物经测序及 Blast 和 MEGA5.0 软件分析，发现均为羊蜱蝇的基因序列，部分序列已上传至 GenBank 数据库，并获得序列登录号：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。
a：雌性羊蜱蝇腹面 4x；b：雄性羊蜱蝇腹面 4x；c：羊蜱蝇的蛹 40x图 2-1 羊蜱蝇体视显微镜观察结果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 扩增及测序对形态学鉴定为羊蜱蝇的样本（n=108）进行 DNA 提取，用 PCR 的方法进行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的扩增，PCR 产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测均得到目的条带，，与预期片段大小一致，电泳图见图 2-2。试验所得 PCR 阳性产物经测序及 Blast 和 MEGA5.0 软件分析，发现均为羊蜱蝇的基因序列，部分序列已上传至 GenBank 数据库，并获得序列登录号：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。
【学位授予单位】：塔里木大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.74
本文编号：2638023
【图文】：
a：雌性羊蜱蝇腹面 4x；b：雄性羊蜱蝇腹面 4x；c：羊蜱蝇的蛹 40x图 2-1 羊蜱蝇体视显微镜观察结果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 扩增及测序对形态学鉴定为羊蜱蝇的样本（n=108）进行 DNA 提取，用 PCR 的方法进行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的扩增，PCR 产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测均得到目的条带，与预期片段大小一致，电泳图见图 2-2。试验所得 PCR 阳性产物经测序及 Blast 和 MEGA5.0 软件分析，发现均为羊蜱蝇的基因序列，部分序列已上传至 GenBank 数据库，并获得序列登录号：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。
a：雌性羊蜱蝇腹面 4x；b：雄性羊蜱蝇腹面 4x；c：羊蜱蝇的蛹 40x图 2-1 羊蜱蝇体视显微镜观察结果Fig. 2-1 Results of stereomicroscope observation of the Melophagus ovinus2.3.2 PCR 扩增及测序对形态学鉴定为羊蜱蝇的样本（n=108）进行 DNA 提取，用 PCR 的方法进行 12SrDNA、16S rDNA 和 18S rDNA 基因片段的扩增，PCR 产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测均得到目的条带，，与预期片段大小一致，电泳图见图 2-2。试验所得 PCR 阳性产物经测序及 Blast 和 MEGA5.0 软件分析，发现均为羊蜱蝇的基因序列，部分序列已上传至 GenBank 数据库，并获得序列登录号：MH102302、MH102303（12S rDNA）；MH102311、MH119054（16S rDNA）；MH119055－MH119058（18S rDNA）。
【学位授予单位】：塔里木大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.74
【参考文献】
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本文编号：2638023
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