猪伪狂犬病毒变异株分离鉴定及免疫抗体检测

发布时间：2020-04-25 01:08

【摘要】：本研究从河南某发病猪场的发病仔猪脑组织中成功分离到一株伪狂犬病毒,对该病毒进行了鉴定,确定为伪狂犬病毒变异株,命名为HN2012株,并对其进行了gE基因组的扩增以及遗传进化分析,同时对HN2012株基因缺失疫苗(gE~-、gE~-/gG~-)进行了抗体检测以及攻毒保护效果进行初步评价。1、伪狂犬病毒变异株的分离鉴定以及遗传进化分析将病料组织上清液接种到BHK-21细胞上,培养36h后,细胞开始出现肿胀、变圆、聚集、出现合胞体等明显的病变。在经过3次克隆纯化的病毒液在BHK-21细胞上培养可以测得TCID_(50)为10~(-7.57)/0.1ml。将病毒液接种昆明小鼠、家兔、仔猪等实验动物,均出现典型的伪狂犬症状。gE氨基酸序列分析对比结果表明,HN2012与其它毒株同源性为94.82%-99.83%。其中与国内分离株同源性为97.07%-99.83%,与国外分离毒株同源性为94.82%-96.03%,2012年以后分离毒株同源性为99.14%-99.83%。HN2012与其它毒株序列出现1-30不等的变异。以上结果表明国内分离的PRV毒株已经明显的划分为两个亚群:2012年前分离毒株亚群和2012年后分离毒株亚群。该结果为今后猪伪狂犬病毒疫苗株的选择提供了有益的参考。2、疫苗效力的检验疫苗效力实验通过免疫昆明小鼠后攻毒HN2012株来对三种疫苗效力进行评价,根据兽用生物制品质量标准汇编(2011)中的猪伪狂犬病油乳剂灭活疫苗的效力检验要求:对照组全部死亡,实验结果成立,实验组二免保护率应至少达到70%,该疫苗的效力检验合格。实验结果表明:这三种疫苗的二免保护率全部高于70%,所以三种疫苗效力检验全部合格。根据《兽药质量标准》(2017年版)中猪伪狂犬病灭活疫苗效力检验规定,检验gE~-和gE~-/gG~-对靶动物的效力。实验结果表明两种基因工程疫苗株免疫猪血清中和指数均大于316,结果判定合格,因此两株基因缺失灭活疫苗效力检验都符合国家《兽药质量标准》检验标准。综上所述,本研究检验的猪伪狂犬病毒变异株HN2012的两株基因工程疫苗株都具有良好的免疫保护效果,为我国猪伪狂犬病防控和疫苗株选择提供积极的数据支持。
【图文】：

亚科,疱疹病毒,病毒粒子,疱病

又名猪疱疹病毒 I 型，是猪的疱疹病毒，属于疱病毒甲亚科又可以分为单疱疹病毒属，水痘病毒病毒属等[5]。本亚科大多数具有细胞培养生长迅特性[6],多数甲亚科疱疹病毒宿主单一，但 PRV 宿基本结构完整的病毒粒子由核心、衣壳、皮层及脂质双层膜的病毒粒子直径为 150-180nm[7]。核心内包含护基因组 DNA 的核衣壳含有 162 个壳粒，呈正多糖蛋白。到目前为止，伪狂犬病毒中已发现 gB、gC、gD、gE、gH、gI、gK、gL、gM、gN，其gH/gL，gM/gN 形成异源二聚体[8,9]。这些糖蛋白中L 区段编码，，gD、gE、gG、gI 由 US 区段编码。

扩增片段,断奶仔猪,鉴定结果,培养液

HN2012株gE基因的扩增片段Fig.2.1gEamplifiedfragmentsofHN2012strain
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.651

【参考文献】