宁夏地区奶牛乳房炎念珠菌分离株毒力因子、耐药性及生理学特性研究

发布时间：2020-04-26 13:06

【摘要】：念珠菌作为一种条件致病菌是引起真菌性奶牛乳房炎的主要病原菌之一。念珠菌致病性强弱与其毒力因子的携带情况有关,这些毒力因子主要有二相性、溶血活性、细胞表面疏水性和磷脂酶活性等。克柔氏念珠菌等多种念珠菌对多种抗真菌药物具有天然耐药性。营养条件、pH值以及离子等能够影响念珠菌耐药性及毒力因子的表达。非白念的感染率日益上升,而对于非白念的相关研究较少。本课题通过对宁夏地区奶牛乳房炎非白色念珠菌分离株毒力因子、耐药性及生理学特性研究,从而为了解和治疗由念珠菌引起的奶牛乳房炎打下基础。通过采集482份疑似感染真菌性乳房炎的奶牛奶样,经分离鉴定得到的60株念珠菌中包括14株克柔氏念珠菌(C.krusei)、6株近平滑念珠菌(C.parapsilosis)和4株近邹褶念珠菌(Candida rugosa)等9种念珠菌;毒力因子检测发现,克柔氏念珠菌分离株CK1和近平滑念珠菌分离株CP1携带所检测的全部毒力因子,近邹褶念珠菌分离株CA1携带除磷脂酶外的三种毒力因子;药物敏感性试验发现,试验株CK1对酮康唑和伊曲康唑耐药,对于试验所选四种耐药基因(CDR1、CDR2、MDR1和ERG11)出现高表达;CP1和CA1耐药性较弱,对五种抗真菌药物表现为敏感及剂量依赖。采用三唑类药物、咪唑类药物、氟尿嘧啶类药物和多烯类药物联合作用,通过计算抑菌浓度指数分别得到协同、相加、无关和拮抗四种作用结果。通过模拟奶牛乳房内环境设置不同温度及pH条件组,并分别添加Cu2+和抗生素作用于试验株,结果发现温度达到42℃时只有克柔氏念珠菌能够在沙氏琼脂培养基表面生长,Cu2+浓度达到3.2μg/mL时开始抑制念珠菌的生长,抗生素的添加能够促进试验株的生长。随着温度、pH及Cu2+浓度的升高,各念珠菌对抗真菌药物的敏感性升高。研究结果表明,感染宁夏地区奶牛真菌性乳房炎的病原菌主要为克柔氏念珠菌及近平滑念珠菌,该地区引起真菌性奶牛乳房炎的致病菌以非白色念珠菌为主。分离株携带多种毒力因子,克柔氏念珠菌表现出强疏水性;念珠菌分离株表现为多重耐药,克柔氏念珠菌分离株耐药性尤其严重,与其多药耐药基因及唑类药物耐药基因高表达有关;念珠菌所携带的毒力因子及耐药性强弱会因多种生理条件的改变而改变,温度和pH的变化是影响念珠菌生长情况、耐药性及毒力因子表达情况的重要因素。Cu2+具有抑制念珠菌的生长、增强念珠菌对抗真菌药物的敏感性以及抑制毒力因子表达的作用。抗生素的使用能够直接促进念珠菌的生长,并且易使念珠菌产生耐药性,这也是导致奶牛乳房炎症状严重的原因之一。
【图文】：

状态图,显色,状态

图２－１克柔氏念珠菌显色状态逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ邋ｓｔａｔｅ邋ｏｆ邋Ｃａｎｄｉｄａ邋ｋｒｕｓｅｉ逡逑

念珠菌,革兰氏染色,酵母菌,鉴定结果

２．３．２．２革兰氏染色鉴定结果逡逑将２５６株疑似酵母菌菌株经革兰氏染色后，通过显微镜观察到全部呈阳性，且细胞形态相似，逡逑菌体较大，呈卵圆形或椭圆形，部分菌株可形成菌丝态。（图２－２）。逡逑图２－２革兰氏染色镜检（ｌＯＯＯｘ）逡逑Ｆｉｇ邋２－２邋Ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ邋（１００0ｘ）逡逑２．３．２．３分子生物学鉴定结果逡逑得到的２５６组基因组ＤＮＡ通过超微量分光光度计进行浓度与纯度的检测ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值逡逑均在１．７－１．９之间。经琼脂糖凝胶电泳后，得到约２５０ｂｐ大小的条带，，大小与两株标准株一致。（图逡逑２－３）。逡逑Ｍｌ邋２逦３逦４逦５逦６逦７逦８逦９逦１０逦１１逦１２逦１３逡逑：（ＭＨ！ｂｐ逦＾逦：，广．．逡逑ｂｐ逦＞逡逑图２－３邋ＩＴＳ区ＰＣＲ结果逡逑Ｆｉｇ邋２－３邋ＩＴＳ邋ｒｅｇｉｏｎ邋ＰＣＲ邋ｒｅｓｕｌｔ逡逑２．３．２．４基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ）鉴定结果逡逑通过质谱鉴定后，２５６株疑似酵母菌中６０株念珠菌被鉴定为念珠菌属，其中克柔氏念珠菌（Ｃ．逡逑ｋｒｕｓｅｉ）邋２３．３３％邋（〗４／６０）和近平滑念珠菌（Ｃ．邋ｐａｒａｐｓｉ】ｏｓｉｓ）】０％邋（６／６０）是本次分离所占比例最逡逑高的两种菌。此外还分离出７种不常见的念珠菌菌种：解脂念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ邋ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）邋８．３３％逡逑（５／６０），葡萄牙念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ邋ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）邋８．３３％（５／６０），近部措念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａｒｕｇｏｓａ）６．６７％逡逑（４／６０）
【学位授予单位】：宁夏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.611

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