TCDCA抗炎免疫调节作用机制的转录组学研究

发布时间：2020-04-28 08:03

【摘要】：牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)作为胆汁酸的主要活性成分之一,不仅对急、慢性炎症均有抑制作用,而且还能调节机体的免疫功能。为了深入揭示TCDCA的抗炎免疫调节作用,本研究开展了下列主要内容的研究:(1)采用实时荧光定量PCR检测了TCDCA作用于AA模型大鼠成纤维滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)的时效关系曲线;(2)采用转录组测序(RNA-seq)技术对TCDCA作用于AA模型大鼠FLS细胞进行了转录组测序;(3)采用实时荧光定量PCR技术验证差异表达基因GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB的表达;(4)采用免疫荧光术检测NR8383细胞内糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的表达及不同浓度TCDCA对NR8383细胞核移位的影响;(5)采用实时荧光定量PCR法检测了TCDCA对AA模型大鼠FLS细胞中VCAM-1和COX-2基因的表达;(6)采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了TCDCA对AA大鼠FLS细胞中VCAM-1蛋白的表达。结果表明:TCDCA作用于FLS细胞最佳作用时间为12 h;应用RNA-seq技术对4个实验组的12个样本进行测序后筛选出24个差异基因;从初筛的差异基因中,挑选出与抗炎免疫相关的差异基因共5个,分别为GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF、CSTB;TCDCA可以上调SRSF9、GPX3、CSTB mRNA的表达量。结果还证明1×10~(-5)mol/L浓度的TCDCA可显著的(p0.05)上调CTGF mRNA的表达量;10~(-5)、10~(-7)mol/L的TCDCA可极显著的(p0.01)上调GAPDH mRNA的表达量;TCDCA可以极显著性(p0.01)的激活NR8383细胞内的GR受体,且在加入GR的特异性抑制剂RU486之后,GR受体的荧光值显著下降;而TCDCA组和DEX组间无显著性差异(p0.05);TCDCA可以抑制VCAM-1及COX-2的表达量。本试验研究的主要结论:(1)TCDCA促进FLS中TGR5及GR受体表达的最佳时间为12h;(2)TCDCA作用于FLS后,经RNA-seq测序共筛选出24个差异表达基因,其中与抗炎免疫相关的差异基因为GAPDH、GPX3、SRSF9、CTGF及CSTB;(3)经实时荧光定量PCR法验证,GPX3、SRSF9与转录组测序结果相一致;CTGF、GAPDH与转录组测序结果则不相一致;CSTB与转录组测序结果虽不相一致,但与文献报道一致;(4)TCDCA能够上调AA模型大鼠FLS中GPX3、SRSF9及CSTB的表达量;(5)TCDCA能够使NR8383内的GR受体发生核移位,显著抑制VCAM-1、COX-2的表达量。综上所述,TCDCA抗炎免疫调节作用与其上调GPX3、SRSF9和CSTB的表达量以及激活糖皮质激素受体,继而抑制VCAM-1、COX-2的表达量有关。
【图文】：

分子结构图,分子结构,胆烷,蛇胆汁

内蒙古农业大学硕士学位论文研究概况的理化性质氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid，TCDCA）是胆汁酸（性成分之一，其化学名称为 3α，7α-二羟基-5β-24-胆烷酰鹅去氧胆酸（Chenodeoxycholic acid，CDCA）的氨基之为一种结合型胆汁酸。主要存在于鸡、鸭、牛、羊、蛇胆汁中含量最高[1]。其分子式为 C23（OH）2H37CONHCH 499.69。图 1 为 TCDCA 的分子结构。

信号通路,基因组学,经典

；TCDCA 能提高小鼠血清平均溶血素含量和血清中溶单核—巨噬细胞吞噬功能及抑制小鼠迟发型变态反应，β、IgG 含量以及脾细胞 IL- 2 基因表达[9]。此外，UchidaDCA 能减轻小肠炎症，，减少由吲哚美辛诱发的急慢性小游走[10]。Funaoka M 等报道 TCDCA 能提高大鼠枯否氏A 抗炎免疫调节相关通路的研究概况证明，TCDCA 发挥抗炎免疫调节作用，一方面与糖oid receptor，GR）介导的基因组学信号通路有关，另一体 5（Gprotein coupled bile acid receptor 5，TGR5，GPBA 信号通路有关。糖皮质激素（Glucocorticoid，GC）主学信号通路而发挥抗炎免疫调节作用[12-14]。如图 2 所示/EP4-G 蛋白-AC-cAMP 信号通路发挥抗炎和免疫调节作
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.4

【参考文献】