鸡源沙门氏菌多重耐药的分子特征

发布时间：2020-04-28 12:47

【摘要】：沙门菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病的肠道致病菌,严重威胁人和动物的健康和生命安全,一直是公共卫生学和兽医学讨论的热点话题。近年来随着抗菌药物的广泛使用和滥用,鸡源沙门菌对抗菌药物的抗性快速传播,尤其呈多重耐药的菌株更加明显。本试验的目的是研究鸡源沙门菌的药物敏感性特征、耐药基因检测及其流行性特征,以及1株耐四环素类抗生素的tetM基因的上下游环境。通过细菌分离鉴定、药敏试验、耐药基因检测,研究鸡源沙门菌多重耐药性;通过ERIC-PCR研究产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)和AmpC酶的鸡源沙门菌之间的进化关系;通过接合试验、质粒提取、质粒不相容群分析、Overlapping PCR分析tetM基因的上下游环境。1、2016年9月至2017年12月从河南、湖北、山西、江西、湖南、安徽、陕西等7个省份合作养鸡场中采集疑似沙门菌感染的病死鸡的肝脏样品860份,参考食品卫生卫生学检验沙门菌检验(GB/T4789.4-2010)标准,具体通过SS琼脂、科玛嘉沙门菌显色培养基进行细菌初筛,再通过16S rRNA和特有侵袭基因(invA)扩增、测序进行鉴定,最终分离出156株鸡源沙门菌。2、根据CLSI推荐的标准,采用微量肉汤稀释法对156株鸡源沙门菌分离株进行了13种常用抗菌药物的药物敏感性试验,结果显示,分离株对阿莫西林、土霉素、磺胺、多西环素的耐药率最高,分别为100%、99%、97%和87%;其次为氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素,耐药率分别为57%、49%、49%;对头孢噻呋、头孢喹肟、喹乙醇、痢菌净较为敏感,耐药率为27%、26%、22%、15%;对阿米卡星和黏菌素最敏感,敏感率为97%、99%;并且分离株全部为多重耐药株,最低对3种抗菌药物耐药,最高对11种抗菌药物耐药,87%沙门菌对5种及其以上抗菌药物耐药,说明沙门菌多重耐药株较多。3、用PCR方法扩增相应的耐药基因,并对部分分离株进行接合试验。耐药基因扩增显示,对于β-内酰胺类耐药基因,10株产CTX型超广谱β-内酰胺酶,其中5株为CTX-M-65,3株为CTX-M-14,2株为CTX-M-55;bla_(OXA-1)检出阳性29株,bla_(OXA-2)检出阳性18株,bla_(TEM)检出阳性41株;对于产AmpC酶的鸡源沙门菌,4株为bla_(cmy-2),未检测到bla_(SHV)。对于四环素类耐药基因,tetA和tetB检出率较高,分别为51%、38%,tetC和tetM检出率较低,分别只检测到8株和1株,未检测到tetD。对于氨基糖苷类耐药基因,只检测到rmtB,检出率为3%。对于氟苯尼考耐药基因,floR检出率为35%。对于喹乙醇通过质粒介导的多药外排泵耐药基因,oqxA和oqxB检出率均为13%。磺胺耐药基因sul 1检出率最高,高达96%。质粒介导喹诺酮类一系列耐药基因均未检测出。接合试验显示,成功获得1株含tetM的接合子,质粒类型为FIA、FIB、FII。4、在ESBLs中,CTX-M型ESBLs较常见,也呈多样流行,bla_(CTX-M)基因的下游因亚族不同而存在差异,CTX-M-1族大多为orf477,而CTX-M-9族大多为IS903,而上游普遍存在ISECp1。5、通过定位PCR可知,tetM基因上游为转座基因tnpA1、Tn916的不完整orf13阅读框片段,下游与不完整的转座基因tnpR相连。
【图文】：

革兰氏染色,特异性基因,测序

图 1-1 革兰氏染色图Fig1-1 Gram stains of Salmonella 和沙门菌特异性基因 invA 的扩增和测序，结果从 860 份样品

基因扩增,凝胶电泳,沙门菌,产物

图 1-2 invA 基因扩增产物凝胶电泳图Fig1-2 Agarose gel electrophoresis of invA gene PCR products源沙门菌耐药谱鸡源沙门菌进行耐药谱分析，，结果显示，多重耐药谱 AMO-OXOX-ST-FFC 所占得比例较高，均为 10% ，并且主要的多
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.61

【参考文献】