陕西部分地区山羊泰勒虫及无浆体的感染情况和虫种鉴定

发布时间：2020-04-28 11:16

【摘要】：泰勒虫(Theileria)和无浆体(Anaplasma)是2种重要的蜱传性血液原虫,已在世界上多个国家和地区发现其感染。Theileria及Anaplasma主要感染热带及亚热带的反刍动物,严重危害动物健康,降低动物的生产性能。陕西省是重要的养羊大省,拥有众多的地方品种。本研究利用显微镜检查及序列分析技术对陕西省部分地区不同品种和年龄山羊的Theileria及Anaplasma的感染率和种类进行了较为系统的研究。1.本研究采集了陕西省米脂县、绥德县、清涧县、三原县、蓝田县、麟游县及镇巴县的14个养殖场的509份山羊血液样品,血液涂片和吉姆萨染色发现268份(52.7%)血液样品存在泰勒虫的感染。发现了3种虫体形态,其中圆点形虫体大小为1.0μm~2.2μm,卵圆形虫体大小为0.9μm~1.1μm×1.7μm~3.0μm,短杆状虫体大小为0.8μm~1.2μm×1.7~3.0μm。不同地区Theileria的感染率差异极显著(P0.01),其中镇巴县感染率最高(92.6%,112/121),而三原县未发现感染;不同品种Theileria的感染率差异极显著(P0.01),陕南白山羊感染率(92.6%,112/121)显著高于其他品种山羊,其次为关中奶山羊(55.1%,125/227)和陕北白绒山羊(22.3%,31/139),而萨能奶山羊未发现泰勒虫的感染;4个年龄段山羊的Theileria感染率差异也极显著(P0.01),其中7~12月龄山羊的感染率最高(76.7%,46/60),而3~6月龄的感染率(19.2%,19/99)最低。基于Theileria SSU rRNA基因对显微镜检查阳性样品进行巢式PCR扩增发现,所有显微镜检查阳性样品均能扩增出单一目的条带,序列分析发现存在2种泰勒虫虫种,即T.luwenshuni及Theileria sp.OT3;其中,T.luwenshuni为优势种,广泛分布于米脂县、绥德县、清涧县、蓝田县及麟游县,而Theileria sp.OT3仅发现于麟游县12月龄以上的关中奶山羊。2.对7个县的14个养殖场采集的509份山羊血液样品进行Anaplasma分子检测发现,总感染率为58.5%(298/509)。不同地区Anaplasma的感染率差异极显著(P0.01),镇巴县的感染率(84.3%,102/121)极显著(P0.01)高于其他6个地区,而三原县未发现感染;不同品种山羊的Anaplasma感染率差异极显著(P0.01),陕南白山羊感染率最高(84.3%,102/121),其次为陕北白绒山羊(58.3%,81/139)和关中奶山羊(50.2%,114/227),感染率最低的为萨能奶山羊(4.5%,1/22);不同年龄Anaplasma感染率差异极显著(P0.01),0~2月龄的Anaplasma感染率最高(80.0%,12/15),而3~6月龄Anaplasma感染率最低(44.4%,44/99)。种系发育分析发现,本研究所调查地区存在3个Anaplasma种类:A.bovis、A.ovis和A.phagocytophilum。其中,A.bovis广泛分布于麟游县、蓝田县、米脂县、绥德县、清涧县及镇巴县的所有年龄段;A.ovis分布于麟游县、米脂县、绥德县及清涧县的所有年龄段;而A.phagocytophilum在麟游县、蓝田县、绥德县、清涧县及镇巴县所有山羊年龄段中均能检测到。所检测的509份山羊血液样品中114份(22.4%)同时感染2种或2种以上Anaplasma,6份(1.2%)同时感染3种Anaplasma。A.bovis见于所有山羊品种,A.phagocytophilum见于关中奶山羊、陕北白绒山羊及陕南白山羊,而A.ovis仅见于关中奶山羊及陕北白绒山羊。综上所述,陕西省部分地区山羊存在Theileria及Anaplasma的感染,Anaplasma的感染率略大于Theileria,共检测到2种Theileria(T.lunwenshuni及Theileria sp.OT3)和3种Anaplasma(A.bovis、A.ovis及A.phagocytophilum)。这些研究结果为陕西省乃至全国的山羊Theileria及Anaplasma感染的防控措施的制定提供了基础资料。
【图文】：

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图 2-1 陕西省部分地区山羊样品来源Fig. 2-1 Origins of goats in partial areas of Shaanxi province主要仪器设备净工作台（SW-CJ-1B，苏州安泰空气技术有限公司，中国）、PCR 基因-D，博日科技有限公司，中国）、台式高速离心机（HC-3018，中科中佳公司，，中国）、琼脂糖水平电泳仪（DYCP-31，六一生物科技有限公司，胶成像系统（ChampGel 5000，北京赛智创业科技有限公司，中国）、精Y220，光学仪器一厂，中国）、高压蒸汽灭菌锅（上海博迅实业有限公中国）、微量移液器（北京大龙兴创实验仪器有限公司，中国）等。主要试剂姆萨染色液（北京索宝生物科技有限公司，中国）、血液基因组 DNA 提54，上海生工生物工程股份有限公司产品，中国）；Ex Taq DNA 聚合酶、6DL 5000 DNA marker、溴化乙锭（Ethidiumbromide，EB）（宝日医生物

虫体,多形性,内观,血液涂片

（neighbor-Joining，NJ）构建 SSU rRNA 基因系统进化树，Bootstrap 值设置为 1 000。2.1.2.7 统计学分析利用 SPSS 19.0 软件对陕西省部分地区山羊泰勒虫不同地区、不同品种、不同年龄间的感染率差异进行 χ2检验，当 P < 0.05 时，差异显著；当 P < 0.01 时，差异极显著。2.2 结果2.2.1 山羊泰勒虫的形态学观察结果通过对制备的血液涂片进行显微镜观察，发现 509 份血液样品中有 268（52.7%）份样品红细胞内存在大小约 1 μm 呈圆点形、卵圆形或短杆状多形性虫体，一般均小于红细胞半径，虫体细胞核呈深染的紫红色，原生质呈淡染蓝色（图 2-2）。其中圆点形虫体大小为 1.0 μm～2.2 μm，卵圆形虫体大小为 0.9 μm～1.1 μm×1.7 μm～3.0 μm，短杆状虫体大小为 0.8 μm～1.2 μm×1.7 μm～3.0 μm。进一步对阳性血液涂片进行染虫率统计，发现 268 张阳性血液涂片总体染虫率为 6.79%～86.44%。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.27

【参考文献】