BMDM细胞中胞内菌噬菌体可逆性主动溶源的发生机制

发布时间：2020-05-01 15:13

【摘要】：本研究从单增李斯特菌原噬菌体φ10403s特殊的可逆性主动溶源现象入手,从氧化-还原的角度,研究在液体培养基及巨噬细胞的吞噬体和细胞浆中,氧化和还原对单增李斯特菌毒力基因转录的影响,以及对原噬菌体φ10403s切离、再溶源和进入裂解循环的影响,探讨氧化还原在维持噬菌体-胞内菌-巨噬细胞三者之间生存平衡的作用,结果如下:(1)毒力基因在吞噬体和添加过氧化氢的培养基中转录上调,证明氧化应激是诱导细菌毒力基因转录的环境因素之一;毒力基因在细胞浆和添加低浓度谷胱甘肽的培养基中转录水平也上调,证明低浓度谷胱甘肽也具有诱导毒力基因转录的作用;而在添加高浓度谷胱甘肽的培养基中,毒力基因转录水平下调,证明高浓度谷胱甘肽对毒力基因的转录有抑制作用。因此,有效打破氧化还原平衡,均影响单增李斯特菌毒力基因的转录。(2)氧化应激是诱导噬菌体切离的环境压力之一,同时氧化应激还会诱使噬菌体进入裂解循环。(3)巨噬细胞中的GSH(还原型谷胱甘肽)和单增李斯特菌gshF基因合成的GshF抑制了吞噬体中切离下来的噬菌体进入裂解循环,同时在细胞浆中诱导游离的噬菌体重新整合回细菌基因组中。因此,在巨噬细胞的吞噬体内,氧化应激诱导了细菌毒力的表达和原噬菌体的切离,增强了细胞空泡逃逸的生存能力,同时引起的抗氧化应激及时的抑制了游离噬菌体进入裂解循环,保证了噬菌体-细菌在宿主细胞内的共生,并在细胞浆中生长繁殖。
【图文】：

株重复 3 次（3）平皿盖朝上放置在 37℃温箱内，培养 16h，观察各菌落圈的大小，以 LM10403S作为对照，测定各菌落圈的大小。2.3 结果与讨论2.3.1 成功构建Δhly-LM、ΔgshF-LM 和Δhly-ΔgshF-LM 突变菌株（1）构建重组质粒 pKSV7-hly LA- RA、pKSV7-gshF LA- RA 和回补质粒pHAL-2-gshF将所有含有重组质粒的菌株转接抽质粒后，得到的产物用双酶切法验证，结果如图 2-1~2-3 所示，双酶切后均得到两条清晰的条带：较大片段为线性化质粒（pKSV7 为 7kbp，pHAL-2 为 6kbp），较小片段则是 LA-RA 基因（hly LA-RA 为2184bp，gshF LA-RA 为 1012bp）和 gshF 基因片段（2730bp）。所有的较小片段均经过测序验证，测序结果与模板基因组 100%匹配。

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【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.6

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本文编号：2646782