水貂肠炎病毒抑制Ⅰ型干扰素诱导产生的分子机制研究
发布时间：2020-05-01 18:55
【摘要】：水貂病毒性肠炎是由水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)引起的一种急性高度接触性传染病,是危害养貂业的主要病毒性传染病之一,给世界水貂养殖业造成了重大的经济损失。在固有免疫中,Ⅰ型干扰素(Type Ⅰ interferon,IFN-Ⅰ)是最重要的抗病毒细胞因子,它不仅可以诱导多种抗病毒基因的表达,发挥抗病毒作用,还能调节固有免疫和适应性免疫反应。大多数病毒感染都能诱导IFN-Ⅰ的产生,但MEV感染却抑制IFN-Ⅰ的表达,其机制至今并不清楚。为了进一步了解MEV与其宿主间的相互作用,本课题对MEV抑制IFN-Ⅰ的诱导产生的机制进行了深入研究。本论文研究发现,MEV感染CRFK细胞不能诱导产生IFN-Ⅰ。我们利用qPCR的方法检测了 MEV感染CRFK细胞后不同时间点IFNα、IFNβ及其下游干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)的 mRNA 表达情况,发现 MEV 感染下调了 IFNα、IFNβ和ISGs的表达;而且也抑制poly(I:C)诱导的IFNβ的表达;用外源干扰素IFNα预先处理CRFK细胞6h,发现IFNα对MEV病毒的感染和复制都没有影响。进一步研究发现,MEV的非结构蛋白NS1能显著下调IFNβ的表达;经对NS1结构域的截短片段分析,发现NS1的DNA结合结构域发挥了主要抑制作用;应用染色质免疫共沉淀等技术证明,NS1直接结合在IFNβ的启动子区域抑制其转录。IRF3和NF-κB信号通路对IFN-Ⅰ的诱导产生至关重要,进一步研究发现,NS1下调了信号分子STING、MAVS、TBK1和IKKβ诱导的IRF3和NF-κB信号通路的激活。通过Western blot和激光共聚焦实验发现,NS1通过抑制IRF3和TBK1的磷酸化来阻断IRF3信号通路的激活,但并不影响IRF3的入核。同时还发现,NS1也抑制IκBα的磷酸化降解和p65的磷酸化入核;免疫共沉淀和激光共聚焦实验进一步证明NS1与IKKβ结合干扰IKKβ-IKKα和IKKβ-NEMO的相互作用,减弱IKK复合体的形成,阻断NF-κB信号通路从而抑制IFNβ的转录激活。IKKβ的激酶结构域(Kinasedomain)可促进IκBα的磷酸化降解过程,对IKKβ结构域的截短片段分析,证实了 NS1能够与IKKβ的激酶结构域结合。以上研究结果表明,MEV感染CRFK细胞既不能诱导IFN-Ⅰ的产生,对外源干扰素也不敏感,而且还能抑制IFN-Ⅰ的产生;MEV的非结构蛋白NS1直接结合在IFNβ的启动子区域抑制IFNβ的转录,或靶向IRF3和IKKβ分别抑制IRF3的磷酸化和干扰IKK复合体的形成,阻断IRF3和NF-κB信号通路,从而抑制IFNβ的转录激活。本研究不仅探讨了MEV抑制IFN-Ⅰ诱导产生的机制,同时对MEV的致病机理和新型弱毒疫苗的研发提供了新的理论基础和思路。
【图文】：
中国农业大学博士学位论文逦第一章文献综述逡逑第一草文献综述逡逑１．１细小病毒科简介逡逑细小病毒是一类古老的单链ＤＮＡ病毒，它的研究最早起始于１９５９年，Ｋｉｌｈａｍ和Ｏｌｉｖｉｅｒ从鼠逡逑的肿瘤裂解物中分离得到，并将其命名为大鼠Ｋｉｌｈａｍ病毒（ＦＣｉｌｈａｍ邋ｒａｔ邋ｖｉｒｕｓ，ＫＲＶ）邋（Ｋｉｌｈａｍ邋ａｎｄ逡逑Ｏｌｉｖｉｅｒ，邋１９５９；邋Ｍａｙ邋ａｎｄ邋Ｍａｙ，邋１９７０），之后这类病毒相继被发现并被统一归类为细小病毒科逡逑（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）。根据邋２０１４邋年国际病毒分类委员会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ邋ｏｎ邋Ｔａｘｏｎｏｍｙ邋ｏｆ邋Ｖｉｒｕｓ，逡逑ＩＣＴＶ）公布的结果，细小病毒科分为细小病毒亚科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｎａｅ）和浓核病毒亚科逡逑（Ｄｅｎｓｏｖｉｒｉｎａｅ）两个亚科，其中细小病毒亚科包括细小病毒属（Ｐｒｏｔｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、阿留申水}9病毒逡逑属（Ａｍｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、红病毒属（Ｅｒｙｔｈｒｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、博卡病毒属（Ｂｏｃａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、依赖病毒属逡逑（Ｄｅｐｅｎｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、Ａｖｅｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ、Ｃｏｐｉｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｔｅｔｒａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ８邋个属；浓核病毒亚科包逡逑括重复病毒属（Ｉｔｅｒａｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、短浓核病毒属（Ｂｒｅｖｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、浓核病毒属（Ａｍｂｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、逡逑Ｈｅｐａｎｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｐｅｎｓｔｙｌｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋５邋个病毒属，如图邋１－１邋（Ｃｏｔｍｏｒｅ邋ｅｔａｌ．，２０１４）。逡逑
每个属下至少有一个病毒株的序列被用来产生树。标度表示节点长度。逡逑１．２水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）概述逡逑水貂病毒性肠炎又称水貂传染性肠炎或水貂泛白细胞减少症，是由水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）引逡逑起的水貂的一种急性高度接触性传染病，是危害水貂养殖业的主要病毒性传染病之一。该病以剧逡逑烈腹泻、肠黏膜炎症、白细胞高度减少为特征，具有较氋的发病率和死亡率。１９４７年，加拿大首逡逑一ｔｅｉｎｅｌ邋ｅｔ邋ａｌ．２１Ｗｉｌｌｓ
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65
本文编号：2646953
【图文】：
中国农业大学博士学位论文逦第一章文献综述逡逑第一草文献综述逡逑１．１细小病毒科简介逡逑细小病毒是一类古老的单链ＤＮＡ病毒，它的研究最早起始于１９５９年，Ｋｉｌｈａｍ和Ｏｌｉｖｉｅｒ从鼠逡逑的肿瘤裂解物中分离得到，并将其命名为大鼠Ｋｉｌｈａｍ病毒（ＦＣｉｌｈａｍ邋ｒａｔ邋ｖｉｒｕｓ，ＫＲＶ）邋（Ｋｉｌｈａｍ邋ａｎｄ逡逑Ｏｌｉｖｉｅｒ，邋１９５９；邋Ｍａｙ邋ａｎｄ邋Ｍａｙ，邋１９７０），之后这类病毒相继被发现并被统一归类为细小病毒科逡逑（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）。根据邋２０１４邋年国际病毒分类委员会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ邋ｏｎ邋Ｔａｘｏｎｏｍｙ邋ｏｆ邋Ｖｉｒｕｓ，逡逑ＩＣＴＶ）公布的结果，细小病毒科分为细小病毒亚科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｎａｅ）和浓核病毒亚科逡逑（Ｄｅｎｓｏｖｉｒｉｎａｅ）两个亚科，其中细小病毒亚科包括细小病毒属（Ｐｒｏｔｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、阿留申水}9病毒逡逑属（Ａｍｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、红病毒属（Ｅｒｙｔｈｒｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、博卡病毒属（Ｂｏｃａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、依赖病毒属逡逑（Ｄｅｐｅｎｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）、Ａｖｅｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ、Ｃｏｐｉｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｔｅｔｒａｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ８邋个属；浓核病毒亚科包逡逑括重复病毒属（Ｉｔｅｒａｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、短浓核病毒属（Ｂｒｅｖｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、浓核病毒属（Ａｍｂｉｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ）、逡逑Ｈｅｐａｎｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋和邋Ｐｅｎｓｔｙｌｄｅｎｓｏｖｉｒｕｓ邋５邋个病毒属，如图邋１－１邋（Ｃｏｔｍｏｒｅ邋ｅｔａｌ．，２０１４）。逡逑
每个属下至少有一个病毒株的序列被用来产生树。标度表示节点长度。逡逑１．２水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）概述逡逑水貂病毒性肠炎又称水貂传染性肠炎或水貂泛白细胞减少症，是由水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）引逡逑起的水貂的一种急性高度接触性传染病，是危害水貂养殖业的主要病毒性传染病之一。该病以剧逡逑烈腹泻、肠黏膜炎症、白细胞高度减少为特征，具有较氋的发病率和死亡率。１９４７年，加拿大首逡逑一ｔｅｉｎｅｌ邋ｅｔ邋ａｌ．２１Ｗｉｌｌｓ
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65
【参考文献】
相关期刊论文 前4条
1 孙文香;蒋争凡;;病毒感染引发天然免疫细胞信号转导研究进展[J];中国细胞生物学学报;2013年05期
2 王建科;程世鹏;闫喜军;吴威;;水貂肠炎病毒分子检测技术与基因工程疫苗研究进展[J];动物医学进展;2008年10期
3 ;NF-κB and Its Regulation on the Immune System[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年05期
4 姜廷秀,朴厚坤,王喜龙,王义;疑似水貂病毒性肠炎初报[J];毛皮动物饲养;1981年02期
，本文编号：2646953
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