重庆市部分地区动物源沙门菌耐药性分析及ESBLs基因的检测

发布时间：2020-05-07 02:35

【摘要】：沙门菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病致病菌,主要可经过消化道进行传染,其宿主范围广。人、家畜、野生哺乳动物、爬行类动物、鸟类甚至昆虫等均可感染发病,其感染人会导致伤寒、副伤寒、急性胃肠炎、败血症等疾病,感染幼年及青年动物,会使之产生败血症、胃肠炎及其他组织和局部炎症,并且会导致怀孕母畜流产。抗生素的使用与耐药性致病菌之间存在紧密关联,多重耐药菌的出现对公共卫生健康是个严重的威胁,尤其是对广谱头孢菌素和氟喹诺酮类抗生素有耐药性的耐药菌。随着第三代和第四代头孢菌素的广泛使用,细菌的耐药率也逐渐上升,主要出现一类能够水解第三代、甚至第四代头孢菌素的酶称之为超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrump-Lactamases,ESBLs)。产ESBLs的沙门菌通常把抗生素耐药质粒、整合子和转座子携带的可转移元件作为抗生素耐药性传递的供体,参与发病机制的某些ESBLs基因通常与这些抗生素耐药基因元件一起转移,将编码基因ESBLs转移到细菌宿主的基因组或质粒中促进了更具毒性和耐药性的分离株的出现,并因此导致更难以治疗的感染。为了解重庆市部分地区动物源沙门菌的血清型流行情况、药物敏感性情况以及ESBLs基因的流行情况。本研究试验样品为2014年3月至2019年1月采集于重庆市14个区县的养殖场、屠宰场及动物医院,包括北碚区、渝北区、涪陵区、南川区、江津区、大足区、璧山区、合川区、荣昌区、长寿区、丰都县、垫江县、万州区和彭水县。共采集猪、羊、犬、鸡、牛、兔、鸭共7种动物的肛拭子或者心肺组织样品1850份,并对其进行沙门菌的分离鉴定。通过缓冲蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)、木糖赖氨酸Tergitol-4(XLT-4)琼脂培养基、沙门菌显色培养基进行选择培养,再扩增沙门菌特异性基因invA已确定沙门菌。使用沙门菌诊断血清对鉴定为沙门菌的临床分离株进行血清型鉴定,以确定重庆市部分地区动物源沙门菌的流行血清型。根据美国临床实验室标准研究所(Clinical and Laboratory Standards Lnstitute,CLSI)所推荐的沙门菌抗菌药物敏感性试验标准,采用K-B纸片扩散法进行27种药物的敏感性试验,以了解重庆市部分地区动物源沙门菌的耐药情况。使用质粒提取试剂盒提取细菌质粒,使用PCR方法检测临床分离株中11种ESBL基因的携带情况。对PCR产物进行测序后,其结果经BLAST分析比对来确定其ESBL亚型,以检测重庆市部分地区动物源沙门菌的ESBL基因流行情况。结果从1850份样品中分离到不同动物来源的沙门菌76株,其总分离率较低为4.1%。76株沙门菌有73株可以定型,其中3株为粗糙型产生自凝现象不能分型。已定型的沙门菌鉴定出4个血清群共12种血清型,其中优势血清型为德尔卑沙门菌、阿贡纳沙门菌和鼠伤寒沙门菌,优势血清型均属于B群。不同动物源性以及相同动物源的沙门菌显示出对27种抗菌药物的耐药情况均不相同,但也显示出一定的规律。本试验分离菌株对氨苄西林耐药最为严重,对四环素类、酰胺醇类药物耐药也较为严重,对磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类也存在耐药的情况,但对第四代头孢菌素头孢吡肟完全敏感。所有临床分离株显示出的多重耐药情况从0-23种药物不等,其中最高耐23种药物的为1株鸡源沙门菌,最低耐0种药物的现象出现于猪源沙门菌中,占总分离率的6.6%。总体来看猪源沙门菌均表现出耐0-8种药物的规律。76株沙门菌进行11种ESBL基因的检测结果为68株携带至少1种ESBL基因,阳性率达89.5%。其中TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY检出率分别为85.5%、25%、6.6%、5.3%、5.3%。本次试验未检测到SHV、VEB、PER、GES、OXA-2、PSE基因。其中TEM基因广泛存在于每一类动物源沙门菌中,测序分析显示65株TEM基因阳性菌株中其基因亚型以TEM-1和TEM-1a为主。不同沙门菌血清型携带ESBL基因的情况也不一样,在优势血清型德尔卑沙门菌中,存在TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5种耐药基因。在阿贡纳沙门菌中存在TEM、OXA-1基因。通过对试验菌株β-内酰胺类药物耐药表型和ESBL基因携带情况进行比对发现,其符合率为97%,具有很高的一致性。结论:本试验从1850份样品中分离到不同动物来源的沙门菌76株,其中73株可定型的沙门菌共分为12种血清型,重庆市部分地区动物源沙门菌优势血清型为德尔卑沙门菌、阿贡纳沙门菌和鼠伤寒沙门菌。重庆市部分地区动物源沙门菌对氨苄西林耐药最为严重,但对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率为0,且多重耐药情况从0-23种药物不等。本试验共检测出TEM、OXA-1、CTX-M、OXA-10、CMY共5种耐药基因,其中TEM基因检出率最高,其次为OXA-1,且ESBL基因携带与β-内酰胺类药物耐药表型高度一致。
【图文】：

沙门菌,琼脂培养基,生长情况

3-1 沙门菌在 XLT-4 琼脂培养基上的生长 Growth pattern of Salmonella on XLT-4 aga 3-2 沙门菌在 XLD 琼脂培养基上的生长情 Growth pattern of Salmonella on XLD agar

沙门菌,琼脂培养基,生长情况,紫色

择性培养基的生长情况上形成黑色单菌落（图 3-1）；在 X在沙门菌显色培养基上形成紫色单-1 沙门菌在 XLT-4 琼脂培养基上的生长rowth pattern of Salmonella on XLT-4 ag
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.61

【参考文献】