分散固相萃取结合液相色谱-串联质谱法测定饲料中8种脂溶性着色剂
发布时间：2020-05-11 10:33
【摘要】：建立了饲料中8种脂溶性着色剂(对位红、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、苏丹红7B、苏丹红G、苏丹黄)含量的液相色谱-串联质谱测定方法。饲料样品中脂溶性着色剂经乙腈提取,离心后上清液采用分散固相萃取净化,净化液稀释后进行LC-MS/MS分析。样品测定时采用Acquity BEH C18色谱柱进行色谱分离,以0.2%甲酸溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测(MRM)模式检测,同位素稀释内标法定量。8种脂溶性着色剂在1.0~200μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r~2)均大于0.998;在饲料中的方法检出限为5.0μg/kg,定量下限为10μg/kg。在10,50,500μg/kg加标浓度下8种脂溶性着色剂的回收率为102%~111%,批内相对标准偏差(RSD)为2.8%~8.0%,批间RSD为2.8%~7.8%。该方法能满足饲料样品中脂溶性着色剂监控的需要。
【图文】：
*2230SudanⅡ－D6(苏丹红Ⅱ－D6)283.0162.0*2222SudanⅢ－D6(苏丹红Ⅲ－D6)359.076.9*2436SudanⅣ－D6(苏丹红Ⅳ－D6)387.091.0*4038SudanredG－D3(苏丹红G－D3)282.0156.0*2026SudanyellowD5(苏丹黄－D5)231.0120.9*1228*quantitativeion1.4加标回收率实验加标回收率实验样品处理同“1.2”，加标浓度为10，50，500μg/kg，内标物的浓度为200μg/kg。称样后加入标准溶液，涡旋混匀放置0.5h后进行样品处理。2结果与讨论2.1质谱条件的优化图1空白饲料中苏丹红Ⅳ3个子离子(A)及苏丹红Ⅱ－D62个子离子(B)的MＲM色谱图Fig.1MＲMchromatogramsofsudanⅣ(A)andsudanⅡ－D6(B)inblankfeed由于苏丹红和对位红分子中含有氮原子，易带正电荷，因此选择ESI+离子模式。为优化质谱条件，配制含8种着色剂浓度均为100ng/mL的标准溶液(同时配制相同浓度的6种内标标准溶液)。利用该标准溶液在全扫描方式下，优化毛细管电压、锥孔电压、裂解温度、脱溶剂气流速等参数，，得到待测物最强的分子离子峰。在上述质谱条件下，对选定的母离子进行子离子扫描，优化碰撞能量等参数。再经仪器自带Intellistart软件优化和空白样品测定后，确定8种脂溶性着色剂和内标物的质谱条件(见表1)。其中苏丹红Ⅳ根据文献报道［13，16］及自带Intellistart软件优化后起初选择m/z381.0＞91.0和m/z381.0＞106.0两个离子对，但在分析时，m/z381.0＞106.0离子对有一定的干扰峰存在(图1A)，对低浓度(添加10μg/kg)样品的定性定量会造成较大误差，因此本文使用灵敏度能达到要求且无干扰的m/z381.0＞224.5离子。对于6个内标物质标准溶液采用同样的方法优化质谱条件，优化后苏丹红
(含0.2%甲酸溶液)－乙腈的比例为5∶95。结果显示，采用乙腈提取液直接上样或经N-丙基乙二胺(PSA)净化后直接上样时，8种着色剂的抑制基质效应均非常强，如对位红直接上样和50mgPSA净化后的抑制率分别达80%和50%。为减少基质抑制效应，同时简化提取净化步骤，实验尝试利用两方面措施改善基质效应:①用梯度洗脱增加洗脱时间，减少单位时间杂质量;②在上样液中加入一定的甲酸溶液，减少杂质总量。结果发现基质效应得到改善，其中对位红直接上样和50mgPSA净化后的抑制率分别下降至50%和20%，实验最终确定的梯度洗脱条件见“1.3”。图2不同PSA用量下8种脂溶性着色剂的基质效应Fig.2MatrixeffectsofeightfatsolublecolorantsunderdifferentamountsofPSA2.3前处理条件的选择对于食品中的苏丹红和对位红，通常采用在样品中加入乙腈、正己烷、甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙醇、正己烷－丙酮等有机溶剂进行提取，其中前2种溶剂最为常用。而当使用乙腈提取时，溶剂与组织样品的相容性较好，渗透力强，兼有去蛋白和一定的脱脂功能，同时考虑到方法最终用同位素内标定量，为节省溶剂用量，采用5g饲料样品(加标浓度1.0mg/kg)考察了25mL乙腈条件下8种脂溶性色素的提取效率(以外标法定量)。结果显示，极性越低的色素回收率相对较低，但所有着色剂的回收率均在70%以上，因此最终采用25mL乙腈对5g样品进行提龋经提取后未经基质分散固相萃取净化及加入不同PSA量净化的基质效应结果见图2，从图2可知未净化时各着色剂的基质抑制效应较强，当PSA用量达到50mg及以上时，饲料的基质抑制效应已降到可接受的范围(斜率比值介于0.8～1.2之间)，因此最终确定PSA的用量为50mg。2.4线性实验取10μg/mL混合标准中间液，用0.2%甲酸－乙腈(15∶85)混合溶液逐级稀释配制浓度分别?
本文编号：2658324
【图文】：
*2230SudanⅡ－D6(苏丹红Ⅱ－D6)283.0162.0*2222SudanⅢ－D6(苏丹红Ⅲ－D6)359.076.9*2436SudanⅣ－D6(苏丹红Ⅳ－D6)387.091.0*4038SudanredG－D3(苏丹红G－D3)282.0156.0*2026SudanyellowD5(苏丹黄－D5)231.0120.9*1228*quantitativeion1.4加标回收率实验加标回收率实验样品处理同“1.2”，加标浓度为10，50，500μg/kg，内标物的浓度为200μg/kg。称样后加入标准溶液，涡旋混匀放置0.5h后进行样品处理。2结果与讨论2.1质谱条件的优化图1空白饲料中苏丹红Ⅳ3个子离子(A)及苏丹红Ⅱ－D62个子离子(B)的MＲM色谱图Fig.1MＲMchromatogramsofsudanⅣ(A)andsudanⅡ－D6(B)inblankfeed由于苏丹红和对位红分子中含有氮原子，易带正电荷，因此选择ESI+离子模式。为优化质谱条件，配制含8种着色剂浓度均为100ng/mL的标准溶液(同时配制相同浓度的6种内标标准溶液)。利用该标准溶液在全扫描方式下，优化毛细管电压、锥孔电压、裂解温度、脱溶剂气流速等参数，，得到待测物最强的分子离子峰。在上述质谱条件下，对选定的母离子进行子离子扫描，优化碰撞能量等参数。再经仪器自带Intellistart软件优化和空白样品测定后，确定8种脂溶性着色剂和内标物的质谱条件(见表1)。其中苏丹红Ⅳ根据文献报道［13，16］及自带Intellistart软件优化后起初选择m/z381.0＞91.0和m/z381.0＞106.0两个离子对，但在分析时，m/z381.0＞106.0离子对有一定的干扰峰存在(图1A)，对低浓度(添加10μg/kg)样品的定性定量会造成较大误差，因此本文使用灵敏度能达到要求且无干扰的m/z381.0＞224.5离子。对于6个内标物质标准溶液采用同样的方法优化质谱条件，优化后苏丹红
(含0.2%甲酸溶液)－乙腈的比例为5∶95。结果显示，采用乙腈提取液直接上样或经N-丙基乙二胺(PSA)净化后直接上样时，8种着色剂的抑制基质效应均非常强，如对位红直接上样和50mgPSA净化后的抑制率分别达80%和50%。为减少基质抑制效应，同时简化提取净化步骤，实验尝试利用两方面措施改善基质效应:①用梯度洗脱增加洗脱时间，减少单位时间杂质量;②在上样液中加入一定的甲酸溶液，减少杂质总量。结果发现基质效应得到改善，其中对位红直接上样和50mgPSA净化后的抑制率分别下降至50%和20%，实验最终确定的梯度洗脱条件见“1.3”。图2不同PSA用量下8种脂溶性着色剂的基质效应Fig.2MatrixeffectsofeightfatsolublecolorantsunderdifferentamountsofPSA2.3前处理条件的选择对于食品中的苏丹红和对位红，通常采用在样品中加入乙腈、正己烷、甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙醇、正己烷－丙酮等有机溶剂进行提取，其中前2种溶剂最为常用。而当使用乙腈提取时，溶剂与组织样品的相容性较好，渗透力强，兼有去蛋白和一定的脱脂功能，同时考虑到方法最终用同位素内标定量，为节省溶剂用量，采用5g饲料样品(加标浓度1.0mg/kg)考察了25mL乙腈条件下8种脂溶性色素的提取效率(以外标法定量)。结果显示，极性越低的色素回收率相对较低，但所有着色剂的回收率均在70%以上，因此最终采用25mL乙腈对5g样品进行提龋经提取后未经基质分散固相萃取净化及加入不同PSA量净化的基质效应结果见图2，从图2可知未净化时各着色剂的基质抑制效应较强，当PSA用量达到50mg及以上时，饲料的基质抑制效应已降到可接受的范围(斜率比值介于0.8～1.2之间)，因此最终确定PSA的用量为50mg。2.4线性实验取10μg/mL混合标准中间液，用0.2%甲酸－乙腈(15∶85)混合溶液逐级稀释配制浓度分别?
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