江苏部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持续期的初步研究

发布时间：2020-05-16 20:44

【摘要】：猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起猪圆环病毒病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原,自1997年被首次分离以来,已成为继猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后又一致猪免疫抑制的病毒,呈出全球流行,给养猪业造成了巨大损失。2000年我国出现了 PCV2的相关报道,此后PCV2所引发的感染和疾病一直高居不下,对该病的诊断和防治具有重要的意义。本文通过对江苏部分地区病死猪的病料进行PCV2的检测,为该地区PCVAD流行病学提供参考。当前对PCVAD的防制手段主要是接种疫苗,但疫苗并不能阻止PCV2在猪群中的感染和传播,现有商品化疫苗均为灭活疫苗,存在灭活疫苗常见不足。嵌合型PCV1-2活疫苗副作用小、只需要单剂量接种,相对而言更节省成本,并可克服灭活疫苗的不足。通过本实验室构建的嵌合型PCV1-2活疫苗免疫商品猪,并对免疫猪进行PCV2攻毒,通过对免疫攻毒猪进行抗体、增重、病毒载量以及病理组织学研究,评价PCV1-2活疫苗对商品猪的免疫保护效力。1猪圆环病毒2型的分离鉴定于2017-2018年在扬州大学动物医院和某规模化屠宰场(屠宰猪来自江苏部分地区)进行采样,以PCR方法检测样品中的PCV2 DNA,并对单纯感染PCV2样品处理后接种Dulac细胞进行PCV2分离,得到11个PCV2分离株,并对其进行全基因组序列测定。经全基因组测序,11个PCV2分离株中,5株为PCV2b基因型,6株为PCV2d基因型,11个分离株的核苷酸序列同源性为96.7-99.9%。结果表明,PCV2b和PCV2d两种基因型是目前江苏地区PCV2毒株的流行基因型,为江苏部分地区PCVAD的流行病学提供参考,同时,为探索PCV2的进化规律等提供了材料。2嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持续期的初步研究应用本实验室构建的嵌合型PCV1-2活疫苗单倍剂量免疫商品猪,并以商品化灭活疫苗免疫组作对照,初步探讨该活疫苗的免疫持续期。将14头商品猪随机分为四组,嵌合型PCV1-2活疫苗组和商品化灭活苗组各4头猪。第一组试验猪颈部肌肉注射嵌合型PCV1-2活疫苗2×105.3 TCID50/头;第二组试验猪颈部肌肉免疫商品化灭活疫苗2 ml/头;第三组4头猪不免疫作为攻毒对照组;第四组2头猪为健康对照组,每周称重并采集各组试验猪血清检测抗体。免疫后63天对除健康对照组外的所有试验猪攻毒PCV2,攻毒剂量为2×106.0TCID50/头,每周称重并采集各组试验猪血清检测抗体,攻毒后21天,扑杀所有试验猪,采集血清和组织脏器。结果表明:免疫组试验猪免疫后均可刺激机体产生较高水平血清荧光抗体和中和抗体,而活疫苗免疫组试验猪产生抗体时间更早,且抗体水平更高,维持高水平抗体时间更长。荧光定量PCR检测发现,免疫组试验猪均可减轻PCV2病毒血症、降低淋巴结及肺脏PCV2病毒载量。病理组织学观察结果显示,攻毒对照组试验猪肺脏及淋巴结等脏器出现明显病变,而免疫组试验猪损伤轻微。由此可见,PCV1-2活疫苗免疫后可对猪体产生免疫保护,降低攻毒猪体内PCV2病毒载量,减轻PCV2造成的病理损伤。疫苗免疫后至少2个月内可提供高水平免疫保护。
【图文】：

图１－４间接免疫荧光检测结果逡逑

图１－２ＰＣＶ２全基因组ＰＣＲ扩增逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＰＣＶ２邋ｆｏｒ邋ｃｏｍｐｌｅｔｅ邋ｇｅｎｏｍｉｃ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.651;S858.28

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