遮荫紫丁香叶对S.xylosus生物被膜作用及有效成分研究

发布时间：2020-05-19 09:24

【摘要】：目前,引发奶牛乳房炎隐性感染居多,其中木糖葡萄球菌是血浆凝固酶阴性葡萄球菌中一种,是引起奶牛乳房炎的病原菌之一,具有很强的生物被膜形成能力,其在机体内可成为潜在感染源,引起机体对其免疫耐受和耐药性的产生,使得乳房炎持久感染而不愈。因此寻找一种中药干预其生物被膜的形成至关重要。紫丁香叶(Syringa oblata Lindl.)为木犀科丁香属落叶灌木,是一种药用价值高、副作用小和研究潜力大,在临床上疗效显著的药用植物,其有效成分易受到环境干预从而影响疗效,紫丁香叶作为植物光合作用的场所,其体内成分合成与光照强度具有一定关系,而芦丁是紫丁香叶中干预猪链球菌生物被膜形成的主要药效物质基础。因此,本试验通过遮荫调控自然光照强度,对紫丁香叶中以芦丁为代表的黄酮类成分的合成路径进行研究,通过代谢组学和转录组学研究紫丁香叶应对遮荫胁迫的表达模式,以探讨紫丁香叶黄酮类化合物的生物合成,以提高紫丁香叶中芦丁含量。具体研究结果如下:(1)利用结晶紫染色法、高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度计法(UV)研究芦丁、2017年不同月份(5月~10月)和9月不同遮荫(100%光照强度Z_0组、45%光照强度Z_1组和25%光照强度Z_2组)下紫丁香叶提取物对木糖葡萄球菌生物被膜的干预作用及紫丁香叶中芦丁和总黄酮类化合物含量变化,结果表明0.8 mg/mL芦丁能够显著干预木糖葡萄球菌ATCC 700404生物被膜形成(p0.05),同时与Z_0组紫丁香叶提取物相比,Z_1组紫丁香叶提取物干预木糖葡萄球菌ATCC 700404生物被膜形成(p0.05)能力最强,芦丁和总黄酮类化合物含量最高,通过组织化学定位法研究表明总黄酮类成分分布广,说明遮荫有利于提高植物中总黄酮类化合物成分,进一步提高芦丁含量。(2)利用LC-MS和RNA seq技术对Z_0和Z_1组紫丁香叶差异代谢物和差异基因进行研究,结果表明紫丁香叶对光照胁迫的适应是一个复杂的调控网络,其中包含黄酮类化合物生物合成途径,通过对该途径差异基因分析和实时荧光定量PCR验证,结果表明4-香豆素-辅酶(4CL1,TRINITY_DN35155_c0_g1)、反式肉桂酸4-单加氧酶(CYP73A,TRINITY_DN29851_c0_g2)和类黄酮3'-单加氧酶(CYP75B1,TRINITY_DN31579_c2_g5)可能是调控紫丁香叶中芦丁代谢物最相关的基因。综上所述,在紫丁香叶遮荫处理后,通过黄酮类化合物生物合成途径调控,提高了总黄酮类化合物含量和芦丁含量,加强了其干预木糖葡萄球菌生物被膜形成的能力,为紫丁香树GAP种植及紫丁香叶再利用奠定理论基础。
【图文】：

3图 1-1 植物中黄酮类化合物代谢途径[33]igure 1-1 Flavonid metabolic pathway in plants[3体开始，由多种结构基因和调节基因控制。苯丙氨酸氨裂解酶（PAL, Phenylalanine amm），经 4-香豆素辅酶（4CL, 4-coumarate-CoA l-CoA ） ， 在 反 -肉 桂 酸 4-单 加 氧 酶 （ CYP生对香豆酰辅酶 A（p-Coumaroyl-CoA）[34]，，CoA 在查耳酮合酶（CHS, Chalcone synthase）genase）作用下形成二氢山奈酚（Dihydrokae反应[35]。FLS, Flavonol synthase）催化形成芦丁，同时roflavonol 4-reductase/flavanone 4-reductase）和此外，黄酮类化合物的合成还需要碱性螺旋-环通过结合于特定 DNA 序列来控制黄酮类化合

芦丁对木糖葡萄球菌ATCC700404生物被膜的干预作用
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S853.7

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本文编号：2670681