猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及灭活疫苗的研制

发布时间：2020-05-20 15:26

【摘要】：猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种急性高接触性肠道传染病。不同品种和年龄的猪都有明显易感性,但危害最为严重的是哺乳仔猪,其发病率高达100%,死亡率30%~80%不等,临床表现以病猪急性水样腹泻、呕吐和脱水为特征。目前,该病防制主要以疫苗免疫防控为主,但由于该病病原在我国经多年流行变异,国内现有疫苗在不同地区使用时的免疫保护效果存在很大差异。另外,猪场养殖管理水平的差异,仅依靠单次免疫不能完全保证疫苗免疫后产生整齐度高的抗体。因此,猪场迫切需要更高安全性及保护率的猪流行性腹泻疫苗,以保护仔猪免受流行PEDV的侵害,进而控制该病的爆发与传播。本研究采集甘肃省发病猪的小肠组织及内容物进行PEDV的分离鉴定并进行其灭活疫苗的研制,为PED的防控做出了新的探索。研究结果如下:1.PEDV的分离鉴定。从甘肃省某暴发仔猪腹泻的猪场中,采集因腹泻病死的7日龄内的仔猪小肠组织及内容物,经处理后在添加10μg/mL胰酶的Vero细胞中进行病毒分离培养。在Vero细胞上盲传到第5代,出现了明显的细胞病变,继续传至第10代收获病毒液。经过RT-PCR检测、病毒特异性中和试验等鉴定,确定分离出一株猪流行性腹泻病毒,命名为PEDV-GS10株。2.灭活疫苗的研制。在病毒培养过程中,用含8%新生胎牛血清的DMEM培养基进行Vero细胞的传代培养。以0.5%体积比接种PEDV-GS10株至Vero细胞中,37℃温室培养48-72 h,收获病毒。在PEDV-GS10株病毒液中加入终浓度为0.07%甲醛,2-8℃灭活48 h,经无菌和灭活检验合格后,用ISA 61 VG佐剂配制疫苗。仔猪免疫实验发现对仔猪安全有效。3.灭活疫苗的临床试验。将制备的PEDV-GS10株灭活疫苗免疫妊娠母猪,进行安全性试验和有效性试验。结果表明猪流行性腹泻灭活疫苗(GS10株)对妊娠母猪是安全有效的,对妊娠母猪产仔数量及仔猪质量没有影响。哺乳仔猪被动免疫抗体至少可持续至28日龄。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.651

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本文编号：2672822