氟暴露对小鼠睾丸中免疫细胞IL-17A分泌的影响

发布时间：2020-05-26 04:40

【摘要】：[目的]在实验室之前的研究中,氟对于睾丸免疫的影响研究主要集中在氟对于睾丸血睾屏障的破坏上,也证明了氟可以引起睾丸炎症,但对于其具体机制还不清楚。在实验室测序结果中,与氟中毒有关的免疫应答通路有8条,其中白细胞介素-17A(IL-17A)在关节炎中的作用及IL-17信号占据前两位,近年来IL-17A也是自身免疫性疾病的研究热点。本实验以此为出发点,探讨氟对于小鼠睾丸中免疫细胞IL-17A分泌的影响,以及在这一点上与自身免疫性睾丸炎的相似之处。[方法]选取100只8周大健康BALB/c小鼠,随机分为5组,每组20只,分别为对照组、低氟组、中氟组、高氟组与EAO模型组。通过饮水染氟的方式建立氟中毒模型,对照组与EAO模型组均给予去离子水,其余三组分别给予含有25、50、100mg/L NaF的去离子水,参考文献方法利用皮下注射睾丸匀浆加弗氏佐剂的方式建立EAO模型。150d后断颈处死,提取睾丸组织、睾丸间质组织液和间质组织细胞,通过双重荧光技术检测几种免疫细胞分泌IL-17A的情况,采用ELISA、qRT-PCR方法分别检测睾丸间质组织液与睾丸间质组织细胞中与IL-17A分泌有关的细胞因子蛋白及基因的表达量。[结果]1、HE结果表明,氟对于小鼠睾丸组织结构造成了 一定程度破坏,导致了生精细胞的脱落与管间隙的增宽,而EAO组的情况则更为严重,二者所表现出的病理变化相似,但程度不同。2、ELISA结果发现在高氟组与EAO组IL-17A的表达量均显著升高,双重免疫荧光结果也证明了这一点。3、通过双重免疫荧光技术检测了睾丸中与IL-17A相关的四种免疫细胞,发现在氟暴露小鼠与EAO小鼠睾丸中均出现了四种炎症细胞的浸润,统计发现这四种免疫细胞的表达在各个氟处理组与EAO组呈现不同程度的增加。4、应用ELISA技术,检测了睾丸间质组织液中相关的细胞因子IL-6、IL-1β、TGF-β、IL-21、IL-23的含量,结果表明,相比对照组低氟组中TGF-β的表达量显著上升,高氟组中IL-6、TGF-β的表达量显著上升,EAO组IL-6、TGF-β、IL-21、IL-23的表达量显著上升,这其中IL-6与TGF-β的表达量变化在高氟组与EAO组是相同的,而IL-1β的变化没有显著性差异。5、提取睾丸间质组织细胞并鉴定后,通过qRT-PCR检测间质组织细胞中相关细胞因子的mRNA表达量。结果证明与对照组相比低氟组、中氟组IL-6的mRNA表达量显著上升,高氟组与EAO组中IL-6、IL-1β、TGF-β、IL-21四个细胞因子mRNA表达量均显著上升,此外,在高氟组中IL-23的mRNA表达量也显著上升。[结论]与IL-17A相关的四种免疫细胞中,氟中毒小鼠与EAO模型小鼠有两种细胞(巨噬细胞、CD3+T淋巴细胞)的变化是相同的,此外氟暴露小鼠与EAO模型小鼠无论在基因水平还是蛋白水平,几种相关细胞因子的变化均具有一定相似性,可以说明氟中毒小鼠所产生的睾丸炎症与自身免疫性睾丸炎具有一定相似性,这种相似性可能与氟中毒后导致Th17细胞与Treg细胞之间的平衡破坏有关。
【图文】：

２．４小鼠股骨中氟含量的测定结果逡逑攻氟１５０ｄ后，低氟组、中氟组与高氟组小鼠股骨中的氟含量见图１，由图可见，逡逑与对照组相比，各个氟处理组均出现了显著性变化，ＥＡＯ组无明显变化。逡逑５邋４０００ｎ逦ｈ逡逑ｆ３０００－逦＿逡逑ｌ邋２０００逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋２５逦５０逦１００邋ＥＡＯ逡逑ＮａＦ（ｍｇ／Ｌ）逡逑图１小鼠股骨中氟离子含量（ｎ＝７，ｍｅａｎ士ＳＥＭ，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｆｌｕｏｒｉｄｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｆｅｍｕｒ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋（ｎ＝７，邋ｍｅａｎ士ＳＥＭ，＊邋Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑２．５睾丸病理学变化逡逑各组实验小鼠睾丸组织ＨＥ染色（４００ｘ）结果见图２。从图中可见：对照组（Ｆｉｇ．２Ａ）逡逑小鼠无生精细胞脱落，各级生精细胞排列整齐，层次清楚，基膜完整，管腔内可见大量逡逑精子。与对照组相比，低氟组（ｎｇＪＢ）偶见生精细胞损伤脱落，排列不规则，但结构逡逑基本完整，中氟组（Ｆｉｇ．２Ｃ）与高氟组（Ｆｉｇ．２Ｄ）可见睾丸间质增多，，曲精细管和生精逡逑细胞肿胀，曲细精管间间隙变大，高氟组可见大量生精细胞脱落，生精上皮细胞层数减逡逑少

Ｆｉｇ．邋１邋Ｆｌｕｏｒｉｄｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｆｅｍｕｒ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋（ｎ＝７，邋ｍｅａｎ士ＳＥＭ，＊邋Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑２．５睾丸病理学变化逡逑各组实验小鼠睾丸组织ＨＥ染色（４００ｘ）结果见图２。从图中可见：对照组（Ｆｉｇ．２Ａ）逡逑小鼠无生精细胞脱落，各级生精细胞排列整齐，层次清楚，基膜完整，管腔内可见大量逡逑精子。与对照组相比，低氟组（ｎｇＪＢ）偶见生精细胞损伤脱落，排列不规则，但结构逡逑基本完整，中氟组（Ｆｉｇ．２Ｃ）与高氟组（Ｆｉｇ．２Ｄ）可见睾丸间质增多，曲精细管和生精逡逑细胞肿胀，曲细精管间间隙变大，高氟组可见大量生精细胞脱落，生精上皮细胞层数减逡逑少，产生空泡，ＥＡＯ组（Ｆｉｇ．２Ｅ）中可见生精细胞脱落严重，生精上皮细胞层数减少，逡逑个别仅剩余精原细胞层，曲细精管间间隙变大，睾丸间质水肿，出现炎细胞浸润。逡逑－２１邋－逡逑
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S859.8

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本文编号：2681289