木犀草素治疗吡虫啉诱导的鹌鹑肝脏损伤的效果观察

发布时间：2020-05-27 18:38

【摘要】：吡虫啉(Imidacloprid,IMI)是一种对烟碱结构详细分析而研发出来的新型高效杀虫剂,是当今世界中使用最早以及最多的新烟碱类杀虫剂。IMI因其活性高、杀虫谱广、杀虫机制新颖、与传统杀虫剂无交互抗性等特点,在问世28年来,一直受国际市场青睐,然而,随着IMI的广泛应用,它的毒性及其在环境中的危害逐渐受到人们的关注。有研究表明,IMI除了破坏害虫中枢神经系统,还能通过氧化应激,对其他非靶标生物的组织器官造成损伤。肝脏纤维化是肝脏对损伤的愈合反应,对炎症损伤以及氧化应激反应的病理性修复。长期的氧化应激、肝脏损伤快于愈合、内环境发生改变以及炎性因子等持续高水平存在,使得肝脏长期表现慢性炎症以及出现肝脏纤维化发生发展。因此,研究IMI引起肝脏炎症及肝脏纤维化的潜在机制,并以此针对缓解IMI毒性作用具有重要的意义。木犀草素(Luteolin,Lut)是一种天然四羟基黄酮化合物,广泛存在于各种食用植物和药用植物中,木犀草素本身具有很强的生物活性,如抗肿瘤、抗氧化、抗炎症、免疫调节等。本研究旨在探究Lut缓解IMI暴露诱发肝脏损伤的方法,包括肝脏炎症和肝脏纤维化发展。我们通过IMI剂量依赖性试验以及Lut干预试验两种途径,根据IMI暴露以及Lut治疗后鹌鹑机体的氧化应激水平、肝脏炎症和纤维化发展等情况,探讨Lut是如何缓解IMI诱发的慢性炎症过程和肝脏纤维化发展。试验选用体重在90-105 g之间的健康鹌鹑,随机分组(n=10),IMI剂量依赖性试验是连续9周灌胃给予鹌鹑0、2、4、8 mg/kg/天的IMI,Lut干预试验选用暴露IMI 6 mg/kg/天的鹌鹑进行,实验全程自由饮水、采食,温度控制在23-27℃,湿度保持在50%左右。试验过程中每周测量鹌鹑体重、采食量以及活动状况;使用血细胞计数板、Hb试剂盒探究IMI对红白细胞以及血红蛋白的影响;测量血清AST和ALT的活性以及TC和TG的含量,使用超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)试剂盒、丙二醛(Methane dicarboxylic aldehyde,MDA)试剂盒和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)试剂盒检测肝脏抗氧化水平;通过HE染色、马松三色染色和油红O染色观察鹌鹑肝脏组织病理损伤变化;qPCR检测生长转移因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin,VIM)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2,MMP-2)、MMP-9、苯醌氧化还原酶(NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO1)、血红素加氧酶1(Heme oxygenase1,HO-1)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IκB激酶α(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinaseα,IKKα)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和IKKβ的mRNA水平;Western blot检测NF-κB、pNF-κB、Nrf2和TNF-α蛋白水平的表达。结果显示:IMI剂量依赖性实验中,随着IMI剂量的增高,肝脏损伤增加,暴露于IMI的鹌鹑表现出更严重的氧化应激水平,更高浓度的脂质过氧化产物MDA,以及低浓度的GSH水平和低活性的SOD。Lut干预IMI试验显示,通过Lut的干预,IMI治疗组肝脏明显好转,IMI治疗组TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子的含量或基因表达量较IMI组显著降低,TGF-β1、VIM和Collagen I等纤维化指标基因表达量显著降低,MMP-2和MMP-9基因表达量显著降低,表示由IMI诱导的肝脏炎症、肝脏纤维化得到有效缓解,肝脏氧化损伤显著减轻(P0.05)。Lut通过Nrf2途径,促进Nrf2入核,增加NQO1和HO-1水平增加,有效降低NF-κB磷酸化,进而减少炎性因子以及TGF-β1的产生,从而缓解肝脏炎症和纤维化的发展。综上,Lut通过激活Nrf2信号通路,增强机体抗氧化能力,抑制了NF-κB的激活,减少炎性因子以及TGF-β1的产生,缓解肝脏炎症和纤维化的发展,从而缓解IMI的肝脏毒性作用。本研究将Lut应用于IMI诱导的畜禽肝脏炎症及纤维化的防治提供实践基础,保障畜禽健康养殖。
【图文】：

木犀草素,分子结构式

东北农业大学兽医硕士学位论文t 通常以糖苷型或游离型存在于多种蔬菜和和洋葱的叶子等[50]，其他如在金银花、洋性4’，，5，7-四羟黄酮，分子量 286.23，呈黄溶剂。如图 1-1，在 Lut 结构中 3’4’位置各有一个羰基[52]，这种芳香族化合物的羰基与氧化反应，在体内起到抗氧化的作用。，糖基主要来源与葡萄糖、戊醛糖等碳水Lut 微溶于水，呈弱酸性，室温下稳定存生物效应，从之前的研究中我们得知 Lut 有效的抗增殖作用，在试验过程中，Lut

鹌鹑,体重变化,肝脏损伤

注：*表示与Control组相比差异显著（p<0.05）。Note: *p<0.05, versus control group.图 3-1 鹌鹑体重变化Fig. 3-1 Weight changes in QuailsI 诱导鹌鹑损伤模型试验的体重变化 IMI 诱导鹌鹑肝脏损伤模型试验开始前和结束较 Control 组显著降低（p<0.05），但 IMI+Lut大（p<0.05）。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.39

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