蓝舌病1型病毒VP5蛋白的表达及免疫原性分析

发布时间：2020-05-27 19:09

【摘要】：蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)感染引起的一种非接触性传染病。该病被世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health)列为一种必须申报的烈性动物传染病。BTV主要感染羊、牛等反刍动物。BTV通过库蠓、伊蚊等昆虫在反刍动物之间传播。构成病毒外壳的VP2能够诱导机体产生中和抗体;VP5能够增强由VP2刺激机体产生的中和抗体滴度,可以用于病毒样颗粒的装配和基因工程疫苗的研究。本研究利用原核表达系统表达了BTV1外壳蛋白VP5,又对其免疫原性进行研究,为进一步开展BTV VP5蛋白相关研究奠定了基础。通过构建原核重组质粒pET-28a-VP5,并转化BL21(DE3)感受态细胞。IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot结果表明,重组VP5蛋白分子量约为62kDa,与预期一致。进一步对诱导表达条件进行优化,结果表明用2×YT培养基、在IPTG浓度为0.4mmol/L、温度为25℃、诱导表达6h时重组蛋白可溶性表达量最高。纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置阴性对照。小鼠三免后ELISA检测产生抗体的效价,结果显示效价最高能达到1:2.048×10~5;Dot-ELISA结果显示VP5抗体能与BTV1病毒发生特异性反应。本研究不仅为分析VP5提高VP2的免疫保护效果的作用机制提供了重要的实验材料,并且为进一步研发多价亚单位疫苗和多肽疫苗奠定了基础。
【图文】：

1.2 BTV 双链 RNA 基因组及结构蛋白的分布图构蛋白要结构蛋白 VP2、VP3、VP5、VP7。其中 BTV 血清型的主要决定因素，能够诱导中附有关。缺少 VP2 的 BTV 不具有感染细胞清型的 VP2 核苷酸序列，发现它们之间存域差别，可以通过RT-PCR技术比较其血清型的 VP5 是 BTV 除 VP2 外的又一型特异性抗化作用与病毒致病力有关。VP5 存在于 BT蛋白，具有突出的三角状结构，构成外衣保守，没有明显的变异区[39]。研究表明 VP此在研制疫苗时，VP5 和 VP2 的共同表达能效的 BTV 疫苗具有重要的意义[40]。 VP3 蛋白。VP3 蛋白具有疏水性，是 BTV

BTV 血清型中较为保守并且是一种型特异性抗原。NS1 和 NS2 蛋非结构蛋白，这两种蛋白在感染的细胞中具有很高的表达量。NS基因组区段更容易突变[43]；NS3/NS3A 蛋白翻译后被送至细胞膜，膜中破坏细胞膜的稳定性，，与 BTV 的致病力和病毒活力有关，还粒子的运输和释放。目前尚不清楚非结构蛋白 NS4 的功能[44]。BTV 的形态结构及理化性质TV 属于呼肠弧病毒科环状病毒属 BTV 亚群，有 27 种血清型[45]。一个二十面体对称结构，没有囊膜[46]。BTV 具有双层蛋白衣壳[4即核心衣壳主要由 L3、S7 编码的主要结构蛋白 VP3、VP7 和由 L的次要结构蛋白 VP1、VP4、VP6 构成，与 BTV 病毒的复制有关。有 60 个类似三角状的 VP2 凸起，外周围绕着 120 个 VP5 的球状透蛋白。VP2 与中和抗体的产生有关，是 BTV 血清型特异性蛋白以增强中和抗体的产生，从而能够提高疫苗的功效；VP3 和 VP7，均具有 BTV 抗原决定簇，对 BTV 内部结构的稳定具有重要的
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.65

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本文编号：2684004