乳铁蛋白对LPS诱导的奶牛原代肝细胞炎症反应的抑制作用

发布时间：2020-05-28 07:14

【摘要】：乳铁蛋白是一种天然免疫蛋白,普遍存在于奶牛乳汁等外分泌液中。奶牛不仅整个生产周期都受到乳腺炎和子宫内膜炎等感染性炎症的威胁;同时在奶牛特殊的过渡时期——围产期,机体经历能量负平衡,发生代谢应激和全身性的持续性亚急性炎症刺激,给奶牛的健康和生产性能带来巨大影响。本文通过研究乳铁蛋白对LPS诱导的奶牛肝原代细胞炎性反应的抑制作用及其可能的分子机制,为乳铁蛋白的临床抗炎应用提供理论依据和技术支持。本文以改良的胶原酶两步灌流法分离得到的奶牛原代肝细胞为实验材料。通过MTT法检测LPS对奶牛原代肝细胞活力的影响,利用荧光定量PCR技术检测LPS诱导细胞后特征炎性因子基因的表达,筛选了诱导奶牛原代肝细胞炎症损伤模型的条件;在炎症损伤模型的基础上,加入乳铁蛋白共培养。利用荧光定量PCR及Western Blot技术检测了对相关炎症信号通路中关键蛋白和炎性因子基因的表达。研究结果如下:1000 ng/mL LPS作用于奶牛原代肝细胞24 h,对细胞活性没有显著影响,但可显著提高细胞炎性因子TNF-α与IL-1β基因表达。选择1000 ng/mL LPS刺激奶牛原代肝细胞24 h,建立LPS诱导奶牛原代肝细胞炎症反应模型。乳铁蛋白(1,10,100μg/mL)对促炎性细胞因子的基因表达有抑制作用,对抗炎细胞因子基因表达有刺激增强作用,同时对奶牛原代肝细胞AST与ALT的分泌有抑制作用。乳铁蛋白(1,10,100μg/mL)对LPS诱导的奶牛原代肝细胞TLR4信号通路上TLR4、CD14、MyD88、TICAM1、TICAM2蛋白分子基因表达有抑制作用。同时,乳铁蛋白对LPS诱导的奶牛原代肝实质细胞IκBα的降解和NF-κB p65磷酸化有抑制作用。表明其抗炎作用可能的分子机制是通过抑制TLR4信号通路的MyD88依赖通路和MyD88独立通路(TRIF依赖通路),抑制NF-κB信号通路的激活。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.23

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本文编号：2684907