实验猴结核病流行病学调查及抗体斑点免疫胶体金检测方法的研究

发布时间：2020-05-31 09:09

【摘要】：实验猴在动物实验中具有其他实验动物所无法替代的重要地位。当前西方国家因为动物资源稀缺,动物保护主义者反对,应用成本过高等多种原因而大幅缩减实验猴的研究与应用。而此时,我国实验猴的养殖和应用却随着生物医学、药品、临床实验等学科水平的进步得到迅猛发展,已成为世界第一大实验猴出口国,目前实验猴存栏量约30万(只)。2017年11月27日,世界上首只体细胞克隆猴“中中”在上海中国科学院神经科学研究所的诞生标志着中国率先开启了以遗传背景相同的克隆猴作为实验动物模型的时代。结核病主要是由结核分枝杆菌复合群引起的一类以呼吸系统感染为主,同时可侵袭身体多种组织器官的人兽共患的感染性疾病。舍室集中饲养为结核病在实验猴群中流行提供了条件,结核病不仅危及实验猴生命,同时对接触到患病实验猴的人员健康产生威胁。目前对实验猴结核病的流行状况尚不清楚,给实验猴的结核病控制带来困难。对于灵长动物目前法定的结核检疫方法是结核菌素皮内变态反应试验,结核菌素皮内变态反应试验具有劳动强度大、操作复杂、费时、容易出现误判等特点,除此以外还会与卡介苗和非结核分枝杆菌等具有交叉反应,接受了皮试的灵长动物也会产生强烈的不适。对于结核病的检测需要探索更加灵敏快速的检测方法。血清免疫学检测方法简单、快速、易于自动化、相对廉价,曾经是我国对人临床检验诊断结核病的重要辅助诊断方法。血清免疫学检查还可能发现痰涂片镜检法无法检测出的菌阴结核病例。我国专家共识认为血清免疫学检测方法随着技术不断的发展,具有诊断价值的抗原被不断发现,该方法具有很大潜力。本研究使用免疫学、细菌学、分子生物学对广西某三家猴场饲养的1248只实验猴进行了结核流行病学调查。调查结果显示在广西部分地区实验猴中结核发病率为1.8%(22/1248),在不同年龄段的实验猴中,老年组实验猴发病率最高,发病率为6.42%,其次为幼年组,发病率为4.12%,中年组发病率为0.87%,青年组发病率为0.40%,并在结核感染实验猴病灶组织标本中分离培养出对异烟肼耐药结核分枝杆菌菌株,为相关方面研究积累了数据。本研究对实验猴结核分枝杆菌抗体检测方法进行探索性研究,利用斑点免疫胶体金渗滤法原理建立实验猴结核抗体斑点免疫胶体金检测方法。对60例实验猴血清样本进行检测,与结核菌培养结果作为参照,实验结果显示该方法灵敏、特异、准确,阳性预测值、阴性预测值较高。本研究通过对广西部分地区实验猴开展结核病的流行病学调查,对逐步建立、完善规范化管理提供依据,并提示防治实验猴结核病的重点,以提高实验猴饲养工作者、管理者对结核病的认知。同时对实验猴结核分枝杆菌血清免疫学检测方法进行研究,评估实验猴结核血清免疫学检测效果,为进一步开发实验猴结核分枝杆菌血清学检测方法提供了依据。
【图文】：

异烟肼,利福平,化学结构式,抗结核药物

第一篇文献综述第一章结核病的流行以及危害居世界前三[9]。耐多药结核病是指从患结核病病人的痰或其它标本中分核分枝杆菌菌株至少对异烟肼（Isonicotinic acid hydrazide，IHN）、利mpicin，RFP)两种一线抗结核药物耐药（如图 1-1）[10]。异烟肼和利福平常见的一线抗结核药物，，它们的广泛应用曾一度遏制了结核病在全球范行，但是他们的滥用也产生了结核菌耐药危机[11,12]，在 2017 年全球有核病患者(48 万至 64 万之间)对利福平耐药，其中 82%的人患有耐多药

示意图,耐药基因,结核,探针

图 1-2 结核耐药基因芯片探针排布示意图[9]Fig. 1-2 Schematic diagram of drug-resistant tuberculosis gene microarray probearrangementA：结核分枝杆菌 rpoB 位点为野生型基因芯片图谱；B：结核分枝杆菌 katG315 和inh-15 位点为野生型基因芯片图谱。途中右侧表格中的内容与右侧芯片杂交点阵对应，每五个点位对应右侧一个单元格。图中的代号含义如下 QC：表面化学质控探针； EC：杂交阳性外对照探针； BC：空白对照； NC：阴性对照探针； IC：内对照探针； WT：野生型。2.4 免疫学诊断2.4.1 皮内结核菌素皮肤试验(TST)对非人灵长动物来说，目前法定的结核检疫方法是皮内结核菌素皮肤试验(Tuberculinskintest,TST)，也称结核菌素皮内变态反应或结核菌素皮试，由结核
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.91

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