辽宁省H9N2亚型禽流感分离株鉴定及抗原特性初步分析

发布时间：2020-06-02 00:40

【摘要】：H9N2亚型禽流感病毒是一种低致病性禽流感,这类病毒一般不会导致禽类发病或死亡,但H9N2亚型禽流感病毒可以使患病家禽生产性能降低,严重时H9N2亚型禽流感病毒可以混合其他病毒或细菌感染,造成禽类死亡。H9N2亚型禽流感病毒会和H5、H7等其他亚型禽流感毒株之间发生基因重配,是新发流感病毒重要的基因供体病毒,H9N2亚型禽流感染人类的事件也频繁发生,所以对于H9N2亚型禽流感病毒的防控显得尤为重要。由于各类亚型的流感病毒所导致疾病的治疗和防控策略不同,建立快速的分型检测方法,对于流感的早期诊断和防控有重要意义。本论文首先建立H5、H7和H9亚型流感病毒的分型鉴定PCR方法,利用该方法检测在活禽市场采集到的禽类咽拭子、肛拭子样品,鉴定出11份H9N2亚型禽流感病毒阳性样品。对11份阳性样品进行病毒纯化、分离、增殖,将获得的H9N2病毒命名为A/Chicken/Liaoning/01/2017(H9N2)-A/Chic ken/Liaoning/11/2017(H9N2)。比对11株病毒的HA和NA序列,发现2株病毒A/C hicken/Liaoning/05/2017(H9N2)和A/Chicken/Liaoning/06/2017(H9N2)的HA蛋白在100、221、250、315位点处与其他9株病毒不同。利用H9N2亚型禽流感病毒标准血清分析11株病毒的抗原性,发现A/Chicken/Liaoning/05/2017(H9N2)和A/Chicken/Liao ning/06/2017(H9N2)2株病毒的抗原性发生较大变异,与标准血清结合的血凝抑制价低,推测HA100、221、250、315这四个位点影响了病毒的抗原性。将这2株毒株感染SPF鸡,制备高免血清,经血凝抑制实验发现,高免血清与其它9株病毒结合良好,因此这两株H9N2病毒可能成为辽宁省H9N2亚型禽流感病毒的后备疫苗株。
【图文】：

第二章 H5、H7、H9 亚型禽流感病毒分型检测方法建立及流行病学样品检测。5）向制备管中加入 600 μL Buffer GW，12000 g离心 1min，将 2 mL EP中重复加入 600 μL Buffer GW，静置 2 min。6）取一干净的 1.5 mLEP管，将制备管转移其中，往制备管中间加入 20水，静置 5 min，12000 g离心 2min收集DNA，-20℃保存即可。7）琼脂糖凝胶电泳检测回收结果。结果分型引物检测电泳图H5、H7 和H9 的标准阳性质粒做PCR，产物经过电泳检测，结果如下图 分别为 420 bp、501 bp、488 bp，，目的片段与预期大小一致，且条带单一，证明H5、H7 和H9 这 3 对分型引物是可靠的。

图 2-2 H5 分型引物检测 11 株分离 H9N2 样品电泳图ig.2-2 Electrophoresis of 11 isolated H9N2 samples was detected by H5 typing prim注：M:2000 DNA Marker1：阳性对照2-11:11 株分离 H9N2 样品Note: M：2000 DNA Marker1：Positive control2-11:H9N2 samples isolated from 11 strains
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.65

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 华宇;;如何面对禽流感?[J];紫光阁;2004年03期

2 何浙生;;禽流感病毒的生物学特性与检测方法[J];浙江检验医学;2004年01期

3 魏传芳;李咏梅;;禽流感病毒与人类流感病毒的关系[J];莱钢科技;2006年02期

4 王潇;曹琛福;黄超华;林彦星;花群义;贾伟新;;禽流感病毒H5亚型RT-exoRPA检测方法的建立[J];中国兽医学报;2018年12期

5 杨红杰;;禽流感疾病的预防控制思路探讨[J];农村实用技术;2019年05期

6 曹蓝;马钰;陈艺韵;鲁恩洁;李魁彪;狄飚;;2016年广州市禽类交易市场禽流感病毒监测与分析[J];中国卫生检验杂志;2018年05期

7 李伟;王松;李宁;;我国禽流感的研究进展及成就[J];当代畜禽养殖业;2018年06期

8 刘秀梵;;加强监测,从源头控制和根除家禽流感病毒[J];北方牧业;2018年15期

9 孙燕;李治;;禽流感病毒 跨越物种传播的研究[J];中学生物教学;2005年12期

10 王路;惠永华;赵建东;卫陆梅;王伟杰;燕素萍;;不同禽流感病毒实时荧光RT-PCR试剂盒的比较[J];黑龙江畜牧兽医;2016年24期

相关会议论文 前10条

1 陈化兰;;禽流感病毒与公共卫生[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年

2 春阳;李东;;再论“以科学发展观应对禽流感事件”——评禽流感病毒变种两次恐慌论[A];首届中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2008年

3 邓洁丽;段明星;俞初一;江龙;;聚联乙炔有序组装体在识别禽流感病毒方面的应用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年

4 李娇;王金良;管宇;沈志强;;禽流感病毒诊断方法的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（上册）[C];2009年

5 孙恩泽;谢敏;赵海粟;黄碧海;刘书琳;张万坡;张志凌;王汉中;庞代文;;量子点标记禽流感病毒[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

6 刘桂林;王志宇;张珊珊;;RNAi技术及其在抗禽流感病毒感染中的应用[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年

7 王志宇;张议文;刘桂林;;禽流感病毒的分子生物学研究进展[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年

8 王志宇;刘桂林;张议文;梁仲;张珊珊;卫吉芸;;禽流感病毒的分子诊断技术[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年

9 刘丽玲;王秀荣;陈化兰;;real-time RT-PCR检测禽流感病毒的初步探讨[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年

10 李艳华;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草药的研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年

相关重要报纸文章 前10条

1 本报记者 王静;禽流感传播罪魁：家禽还是候鸟[N];中国科学报;2012年

2 赵熙熙;美重启争议性禽流感病毒实验[N];中国科学报;2019年

3 王方 编译;亚洲马为何不怕禽流感[N];中国科学报;2019年

4 本报记者 周映夏 通讯员 黄海航;注意防控禽流感和流感[N];中山日报;2019年

5 刁有祥;规模化鸭场禽流感的防控措施[N];河北科技报;2017年

6 本报记者 董碧水;杭州全面防控禽流感 禽蛋业遭受打击[N];中国青年报;2013年

7 记者 王梦婕 实习生 谢宛霏;北京进入防控禽流感应急状态[N];中国青年报;2013年

8 本报记者 刘坤U

本文编号：2692322