猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及VP2蛋白优势抗原区的原核表达

发布时间：2020-06-02 05:22

【摘要】：猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)是由猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus,FPV)引起的高度接触性传染病,以白细胞的严重减少和出血性肠炎为典型特征。该病呈世界范围流行,对宠物猫及野生猫科动物构成巨大威胁。FPV是一种无囊膜的单链DNA病毒,基因组两端含有发卡结构,中间部分编码两种蛋白:非结构蛋白(NS1、NS2)和结构蛋白(VP1、VP2)。本研究分离了一株FPV,并进行了生物学特性、基因组分析及VP2优势抗原区的原核表达,为研究北京地区FPV毒株的流行变异奠定基础。本研究从某动物医院一例FPV胶体金试纸条检测为强阳性的患病猫的粪便中分离到一株病毒,在CRFK细胞上盲传5代后,可以观察到明显的病变。经间接免疫荧光试验(IFA)、电镜观察及分子生物学等试验鉴定后,证实为FPV,命名为BJ04株。经动物感染试验证实该毒株能引起典型的临床症状和组织病理学变化。对病毒的全基因组进行克隆和序列测定,利用DNAstar软件对BJ04株与GenBank上公布的FPV、犬细小病毒(CPV)和水貂细小病毒(MEV)共28株细小病毒的VP2基因进行分析,发现BJ04株与其余27株的核苷酸同源性为98.3%~99.9%,氨基酸同源性为97.3%~100%;其中BJ04株VP2蛋白上的6个关键氨基酸与其他FPV毒株一致,也证实BJ04株的宿主为猫;利用DNAstar软件对BJ04株与GenBank上登录的FPV、CPV和MEV共26株细小病毒的NS1基因序列比较,显示核苷酸同源性为98.5%~99.9%,氨基酸同源性为98.1%~99.9%。使用生物信息学软件对BJ04株的VP2蛋白进行了抗原表位预测,确定了VP2蛋白上的第307~408位氨基酸为优势抗原区域,对该区域的基因进行原核表达。蛋白纯化后,进行Western blot试验,结果表明表达的重组蛋白具有很好的反应活性。
【图文】：

图 1.1 细小病毒的结构示意图Figure 1.1 The model diagram of parvovirus（https://viralzone.expasy.org/103?outline=all_by_protein）V 编码的蛋白及功能是一种线性、单链 DNA 病毒，基因组长约为 5123 bp，两端由独特的回文结配对形成发卡双链体（Astell et al., 1985），中间部分编码两个开放阅读框VP1 和 VP2）和非结构蛋白（NS1 和 NS2）。构蛋白与大多数细小病毒粒子的结构基本相同，根据编码结构蛋白的开放阅读框（现 VP1 蛋白编码 727 个氨基酸，其蛋白大小约为 73 kD，VP2 蛋白编码 58小约为 60 kD。VP1 和 VP2 是从可变剪接的 mRNA 中翻译来的，VP2 序列中，且 VP1 具有额外的氨基末端序列（Jongeneel et al., 1986）。VP2 蛋白要成分，该蛋白中某些关键位点的氨基酸变化会导致细小病毒的抗原特性

硕士学位论文 第二章 猫泛白细胞减少症病毒（BJ04），并收集粪便进行排毒情况检测。待攻毒猫死亡后立即进行剖检，采集攻%的福尔马林固定液固定组织，后续送至北京华百泰生物公司进行苏木精病理组织学的观察。体金试纸条检测便上清液滴加至 FPV 胶体金试纸条的加样孔中，，如图 2.1 所示。在免疫胶出现 C 线和 T 线，表明样品中含有 FPV。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.65

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本文编号：2692672