Ⅰ群4型禽腺病毒灭活疫苗及卵黄抗体的研制

发布时间：2020-06-02 20:47

【摘要】：Ⅰ群4型禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV-4)可引起鸡心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS)。2015年以来HHS在我国河南、河北、山东、江苏、安徽、广东等地均有发生和流行,可发生于肉鸡、蛋鸡和三黄鸡等,传播速度快,死亡率高,给养鸡业带来了严重的经济损失。本研究从临床病例中分离病毒,制备灭活疫苗和卵黄抗体,为有效防控该病提供技术支持。1Ⅰ群4型禽腺病毒的分离鉴定及致病性试验2015-2018年,对来自山东、湖北、河北的疑似HHS的临床病例进行了病原的分离鉴定;用分离毒株分别人工感染SPF鸡胚、1日龄和21日龄SPF鸡,采用病理组织学及PCR方法,检测各组织器官的病理学变化、病毒分布及排毒情况。结果发现,感染鸡胚至8dpi全部死亡,6 dpi时死亡胚出现心包积液、肝脏肿大出血等典型病变。1日龄SPF鸡在4dpi时全部死亡,21日龄人工感染的SPF鸡与同居鸡死亡率皆为60%;死亡鸡主要病变在肝脏、心脏及肾脏等器官,其肝脏、心脏、脾脏、胰腺、小肠、肾脏等多器官均检测到该病毒DNA;21日龄感染鸡于3、5、7、14 dpi时均检出泄殖腔排毒,口腔排毒只在7、14 dpi时检出。结果表明该毒株感染性强,致死率高,具有一定的泛嗜性,水平传播能力强,泄殖腔排毒是其主要的排毒方式。2Ⅰ群4型禽腺病毒灭活疫苗的研制从分离毒株中筛选出免疫原性高的毒株,制备油乳灭活疫苗,并用该疫苗接种21日龄SPF鸡,3周后用两个毒株分别攻毒;采用PCR方法检测排毒和病毒的分布情况;采用ELISA方法监测抗体及白介素-2的含量。结果发现,免疫攻毒鸡均无死亡,在3、5、14 dpi时均未检测到排毒,仅在7 dpi时检出少量排毒,14 dpi时存活鸡的各脏器均未检出病毒DNA;免疫后2周抗体水平逐渐升高,攻毒后开始下降,至第5周时抗体水平开始回升;白介素2含量在攻毒前2-3周变化较小,7 dpi时白介素2含量明显升高。结果表明该疫苗具有良好的免疫原性,使机体对两个毒株的感染均具有强的抵抗力。3Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体的制备及应用采用上述疫苗免疫健康商品蛋鸡,制备卵黄抗体,肌肉注射于SPF鸡,两天后采用FAdV-4分离株进行攻毒,检测病毒的分布及排毒情况。结果发现,至14 dpi试验组、对照组死亡率分别为6.67%和60%(P0.01差异极显著);试验组只有肝脏检测到该病毒的DNA,而对照组心脏、脾脏、胰腺等多脏器均能检到;试验组只在7dpi时检到零星排毒,对照组3-7 dpi时均可排毒。表明制备的卵黄抗体能有效中和病毒,使其感染局限在肝脏,抑制机体排毒,为SPF鸡提供有效保护。综上所述,本试验分离毒株致病性强,具有一定的泛嗜性,泄殖腔排毒是其主要的排毒方式;所制备的灭活疫苗和卵黄抗体均能有效保护SPF鸡,使其对Ⅰ群4型禽腺病毒的感染具有较强的抵抗力。
【图文】：

腺病毒,结构模式,衣壳

聊城大学硕士学位论文对称的二十面体结构，这种对称性是腺病毒科所有成员的典型特征[16-18]。主要由衣壳（Capsid）、纤突（Fiber）、核酸芯髓（Core）以及相关蛋白构成。其衣壳具有 252个壳粒，在二十面体的顶角有 12 个顶角壳粒，，称为五邻体（Penton）。每个五邻体有 1 条或两条纤维突起，长度为 100-370A，这些纤突在衣壳的五邻体蛋白上延伸，在纤维的顶端形成头节区（knob）。在病毒的感染过程中主要是病毒的五邻体和纤维的头节区与细胞表面的病毒受体结合。衣壳的其他 240 个非顶角壳粒，叫做六邻体（hexon）。六邻体蛋白是腺病毒的主要结构蛋白，它与五邻体蛋白和纤维蛋白一起构成了腺病毒的外壳，并且包含了主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要抗原决定簇。

电泳图,电泳图,病毒,禽腺病毒

毒情况检测7、14 dpi 时，随机采取 5 只攻毒鸡和对照组的口腔和中，加入含双抗的 PBS 1 mL，将棉拭子头部在管壁反m 离心 10 min，取上清提取病毒 DNA，利用 PCR 方法基因，方法同 2.2.1 和 2.2.2。离鉴定结果禽腺病毒的分离情况均扩增出约 1219 bp 的条带，与预期目的条带相符，说病毒。电泳结果见图 2-1，Hexon 基因进化树见图 2-2，病毒代表株在同一分支，说明分离株为血清 4 型禽腺病别命名为 SD201501 株、SD201601 株、HeB201801 株、
【学位授予单位】：聊城大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.31

【参考文献】