左氧氟沙星抑制伪狂犬病病毒增殖的效果评价

发布时间：2020-06-02 21:12

【摘要】：猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的一种以仔猪发热,脑脊髓炎及妊娠母猪流产为主要特征的急性传染病,是目前严重危害养殖业的重大传染病之一。近几年随着伪狂犬病病毒各种变异毒株的出现,通过疫苗对伪狂犬病的预防和治疗稍显局限,因此寻找和开发有效的抗病毒的药物来防治猪伪狂犬病成为必要补充手段。近年来喹诺酮类药物在抗病毒方面研究取得了一定的成果,国内外也报道了一系列具有疱疹病毒活性的喹诺酮类化合物出现。左氧氟沙星属于喹诺酮类药物的一种,虽然国家已明文规定禁止使用左氧氟沙星作为兽用抗菌药,但其具有的抗病毒的作用有待我们进一步研究利用,国内外已有多篇文献报道出左氧氟沙星的抗病毒作用,如对乙型肝炎病毒的抑制作用,对呼吸道合胞病毒的感染的治疗等。本论文探究左氧氟沙星对PRV增殖的影响,从小鼠和细胞体内外两个方面研究药物抗PRV的活性,为左氧氟沙星对PRV的临床防治上提供新的途径以及挖掘新的抗病毒药物资源都具有及其重要的意义。1、试验由体外细胞开展,在96孔板上培养BHK-21细胞,接种倍数稀释的病毒液,观察细胞的病变情况,并计算出PRV-XJ株的病毒滴度为10~6.79.79 TCID_(50)/0.1 mL。2、试验再次培养细胞和接种倍数稀释病毒液,方法与第一次试验步骤相同,但是本次试验同时加入了不同倍数稀释的左氧氟沙星,观察对比在加入左氧氟沙星和没有加入左氧氟沙星下的细胞病变情况,主要表现在CPE出现时间、CPE孔数等,继续测定此条件下病毒滴度为10~6 TCID_(50)/0.1 mL,对比发现病毒滴度降低,病毒的增殖受影响,证明左氧氟沙星对细胞上PRV的增殖有抑制作用,在试验第18~30 h时,病毒液稀释度在10~(-4)~10~(-6)下,药物在10~20倍稀释下时,药物对病毒增殖抑制作用最明显。3.试验由体内小鼠开展,不同倍数病毒液注射小鼠,观察小鼠的发病情况,计算出PRV-XJ株的病毒滴度为10~3.16.16 LD_(50)/0.1 mL。4.试验继续另选小鼠分组重复攻毒试验,但在48 h再对小鼠注射不同倍数稀释的左氧氟沙星,试验发现小鼠死亡率降低,死亡天数总体延后了1~2 d;测得此条件下的病毒滴度为10~2.48.48 LD_(50)/0.1 mL,对比可知病毒滴度降低,病毒增殖受影响,证明左氧氟沙星对于小鼠体内的PRV的增殖有抑制作用,并且病毒液稀释度在10~(-1)~10~(-3)下,同时在药物10倍稀释下,药物对病毒增殖抑制作用效果最明显。综上,通过体外细胞试验与体内小鼠攻毒试验,证明左氧氟沙星对PRV的增殖有抑制作用,为后续继续研究PRV的抗病毒药物提供试验模型和数据基础,为研究抗PRV新药提供新的思想,为治疗伪狂犬病开辟新的途径和方向等。
【图文】：

每 2 h 在倒置显微镜进行观察，根据倒置显微镜下的细胞病变情况，观察和拍照，记录细胞病变时间和病变孔数，连续观察 4 d，记录结果，制作表格，根据 A~B 行对照组和 C~H 试验组细胞变化情况，按 Reed-Muench 法统计 C~H（12×6）孔数，计算出病毒 TCID50[50]。2 结果与分析2.1 PRV 在 BHK-21 细胞上的增殖情况在倒置显微镜进行观察下发现，在第 4 h，观察到细胞开始出现细胞病变，个别细胞发现逐渐开始变的圆润（图 2-1），并且透亮，细胞的折射性液逐渐增强，再观察的第 24 h 后，发现倒置显微镜下细胞开始大量变圆，，变亮，在第 72 h 之后细胞出现了脱落现象，最后有些出现了死亡，并出现了典型的细胞病变。发现细胞病变不再继续，开始统计 96 孔板上细胞病变孔数，得出 96 孔细胞板接毒情况记录表(表 2-2）
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.28


本文编号：2693771