NYD-SP27基因对绵羊精液品质及精子信号通路的影响

发布时间：2020-06-04 11:56

【摘要】：哺乳动物精子生成的过程主要是睾丸生殖细胞经分化过程后形成精原细胞,再通过一系列复杂的生物学变化,最终分化成成熟精子。精子形成过程中受各种因子和细胞间相互作用的调节,其中包括染色体结构变化,一些内源的调节因子和基因的一系列复杂的程序性表达调控。睾丸发育特异性蛋白-27基因(Testis development specific protein gene 27,NYD-SP27)作为磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的抑制剂,是精子形成的调节剂,对精子的产生具有重要的调控作用。[目的]本研究主要目的是将NYD-SP27基因的上调和下调载体质粒通过睾丸注射后,探究它对绵羊精子活率、畸形率、血清中生殖激素水平以及精子cAMP信号通路中关键酶的表达量等方面的影响,以揭示NYD-SP27基因在精子形成过程中分子机制提供科学依据。[方法](1)本研究以Genbank中的绵羊NYD-SP27基因序列为基础设计引物,克隆羊NYD-SP27基因,将基因连接到真核载体pmcherry-n1中;载体的红色荧光蛋白和目的基因通过猪捷申病毒2 A肽(P2A)连接以实现共表达;(2)将NYD-SP27基因的上调和下调载体质粒通过睾丸注射后,电刺激采精,检测NYD-SP27基因对绵羊精子活率和畸形率的影响;并制作冻精,解冻后检测NYD-SP27基因对精子中肌动蛋白和肌球蛋白的影响;(3)通过ELISA方法检测NYD-SP27基因对精子内cAMP信号通路中相关酶的表达量的影响;(4)将NYD-SP27基因的上调和下调载体质粒通过绵羊睾丸注射后,采集血液,检测血清中生殖激素水平。[结果](1)成功构建了pmcherry-Flag-NYDSP-P2A真核表达重组载体;(2)对照组与FNP组(NYD-SP27基因的上调)精子活率差异不显著(P0.05),对照组与Sh组(NYD-SP27基因的下调)却差异显著(P0.05);对照组与试验组(FNP组和Sh组)精子畸形率差异均不显著(P0.05);对照组与FNP组绵羊精子中肌动蛋白表达量差异不显著(P0.05),对照组与Sh组却差异极显著(P0.01);对照组与试验组精子中肌球蛋白的表达量差异均极显著(P0.01);(3)对照组与Sh组绵羊精子中环磷酸腺苷酸的表达量差异显著(P0.05),对照组与FNP组却差异极显著(P0.01);对照组与Sh组绵羊精子中蛋白激酶的表达量差异不显著(P0.05),对照组与FNP组却差异显著(P0.05);(4)NYD-SP27基因下调(Sh组)对绵羊睾酮水平的分泌具有促进作用。[结论](1)在NYD-SP27基因表达蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中猪捷申病毒2A肽片段起到了剪切作用;(2)NYD-SP27基因下调不仅对可以促进绵羊精子活率的提高,并对精子中肌动蛋白亦产生调控作用;(3)NYD-SP27基因下调对精子cAMP信号通路中起关键作用的环磷酸腺苷酸和蛋白激酶的表达产生调控作用;(4)NYD-SP27基因下调对绵羊睾酮水平的分泌产生调节作用。
【图文】：

信使,调节组,钙离子,甘油二酯

图 1 钙离子动员的信使与调节组成(引自 Michael J. Berridge， 2003)composition of messenger and regulation of calcium ion mobilization (from MicBerridge， 2003)胞培养的相关实验中，，PLC 被 Ca2+激活，并且在激活后引起 PI2 水解成三磷酸肌醇(IP3)和甘油二酯(DAG)。因此，当水解的 I

合成产物,生物工程,琼脂

P2A合成产物M.标准DL2000；1.P2A100bp74bp
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S826

【参考文献】