基于16SrDNA分析的大鼠腹泻病因探究

发布时间：2020-06-08 23:11

【摘要】：实验动物是指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的培育的主要供实验用的动物,遵循实验动物原则。医学上,常用实验动物来探索人类疾病的发病机制,以及寻找预防和治疗的方法,小鼠和大鼠为首要选择。本实验研究对象Wistar大鼠来自吉林大学医学部动物实验中心,雄鼠在体重170g-220g,日龄4-5周(断乳一周)左右产生发生腹泻现象,且部分导致死亡,一周左右恢复健康,期间雌鼠不产生腹泻现象。由于腹泻的原因,导致实验动物的生长发育出现了较大问题。本实验是在相同条件下分笼饲养大鼠,待到发病时候,将腹泻雄性大鼠、正常雄性大鼠和雌性大鼠同时解剖,对其主要器官及消化器官做成石蜡切片,进行HE染色并观察组织学变化,结果表明腹泻雄性大鼠肝脏组织有出血点,推测是由腹泻疾病造成;将实验大鼠的十二指肠内容物与空肠内容物样本提取DNA,利用通用引物进行PCR,并将产物进行16SrDNA宏基因组测序。通过16SrDNA的测序结果进行聚类分析、菌种分析、Alpha多样性分析样本之间的差异。聚类结果表明发现雌性大鼠有感染,但是无腹泻症状,表明该腹泻类型为雄性大鼠特异性疾病。通过菌群差异分析和功能基因分析结果表明:乳酸杆菌、嗜血杆菌等有益菌大量减少,瘤胃球菌、考拉杆菌、颤杆菌、粪芽孢杆菌、脱硫弧菌、幽门螺旋杆菌、普氏杆菌、拟杆菌、Dorea梭菌属和梭状芽孢杆菌XVIII等有害菌数量增多,导致菌群比例失调。本研究采用16SrDNA组学技术,对吉林大学基础医学院实验动物中心所饲养的Wistar大鼠的性别特异性腹泻致病病因进行了研究,其结果为预防和治疗大鼠腹泻疾病提供了病因学依据,同时为实验用的大鼠的供应和健康保障奠定了基础。
【图文】：

雄性大鼠,肝脏

(5)染色的注意事项：不同染色不同的配置方法处理后结果不同；室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况都会影响染色效果，灵活操作；水溶性伊红脱水前进行染色，醇溶性伊红使用与溶解伊红等浓度的酒精开始脱水；在二甲苯脱蜡之前先在 60℃烤箱内 0.5~1 小时，有利于脱蜡且切片牢固不脱落；二甲苯脱蜡、透明的作用。它好坏取决于切片在二甲苯内放置的时间和脱蜡时的温度以及其使用次数。好切片非常透明，有利于在显微镜观察；用梯度酒精脱水时，低浓度酒精中时间短，，在高浓度时逐步延长；在酸性分化液内停留的时间适中，细胞核内结构不易脱色。不做分化处理的注意染色时间，放置染色过度或过轻。1.3 结果1.3.1 实验大鼠肝脏切片观察(1)正常雄性大鼠肝脏 HE 染色切片(1-1、1-2、1-3 正常雄性大鼠)结果图 1.1.11-1-100 倍 1-2-100 倍1-3-100 倍

肝脏,雄性大鼠

泻雄性大鼠肝脏切片(2-2、2-3 为腹泻雄性大鼠)结果如图 1.1.22-2-100 倍2-2-200 倍2-3-1-100 倍2-3-1-200 倍为腹泻雄性大鼠肝脏组织石蜡 HE100 倍和 200 倍的切片图 1.1.2 腹泻雄性大鼠肝脏切片Fig 1.1.2 Diarrhea male rat liver slice观察经 HE 染色的肝脏组织切片，发现 2-3 偶见坏死及出血。雌性大鼠肝脏切片(3-1、3-4 为雌性大鼠)结果如图 1.1.33-1-100 倍 3-1-200 倍
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.91

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