FAdV-4抚顺分离株对SPF鸡胚肝组织氧化损伤的研究

发布时间：2020-06-13 10:02

【摘要】：禽心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)是由血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)引起的禽高度接触性传染病。该病1987年首次在巴基斯坦安哥拉地区爆发,因此又称为禽“安卡拉病”,目前该病在匈牙利、印度、美国、巴西、波兰等多国均曾发生。FAdV-4感染能够引发机体免疫抑制,导致其他疾病继发感染性增强。家禽感染后,以心包积液和肝脏坏死为主要病理变化,但是目前关于FAdV-4对禽类肝组织氧化损伤的影响尚不明确。本试验将探讨FAdV-4对SPF鸡胚肝组织造成的氧化损伤情况。本研究利用实验室保存的FAdV-4抚顺株,接种11日龄SPF鸡胚尿囊腔,感染7d后剖检,观察其损伤情况,同时采取鸡胚肝组织。一部肝组织用10%福尔马林固定,制作石蜡切片,HE染色后进行组织病理学观察;另一部分肝组织,用于肝组织氧化损伤研究:一是肝组织氧化损伤相关指标:利用试剂盒检测鸡胚肝脏中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;二是探讨肝组织氧化损伤Nrf2/HO-1通路:运用荧光定量PCR方法检测Nrf2、HO-1的mRNA水平;采用蛋白免疫印迹技术判断肝细胞中细胞浆、细胞核内Nrf2蛋白表达情况,从而探讨FAdV-4对SPF鸡胚肝脏氧化损伤机理。结果:鸡胚感染FAdV-4后可见鸡胚发育迟缓,剖检可见肝脏呈现黄绿色,表面有出血斑点。组织病理学结果显示,感染鸡胚肝细胞发生严重的水泡变性,细胞核碎裂、溶解,中央静脉和窦状隙扩张,充满大量红细胞。与对照组相比,试验组MDA含量极显著升高(p0.01),SOD活力极显著下降(p0.01),说明FAdV-4能够破坏鸡胚肝脏氧化还原稳态。细胞浆中Nrf2蛋白表达量显著下降(p0.05),细胞核中Nrf2蛋白表达量显著升高(p0.05),试验组Nrf2及HO-1 mRNA表达量极显著下降(p0.01),该结果表明FAdV-4能够激活Nrf2,发生了核转位,但抑制了肝细胞中Nrf2/HO-1通路关键因子Nrf2和HO-1的表达。综上所述,SPF鸡胚感染抚顺株FAdV-4后,能够引起明显眼观病理变化和组织病理学损伤,并诱发肝脏发生氧化损伤反应。Nrf2/HO-1通路中关键因子的表达情况表明,FAdV-4可能通过下调Nrf2/HO-1通路,从而诱导SPF鸡胚肝脏发生氧化损伤。本试验结果为揭示FAdV-4感染SPF鸡胚肝组织氧化损伤的机制提供了理论依据,同时为有效防治心包积液-肝炎综合征、针对Nrf2/HO-1通路中关键分子药物的研发奠定了基础。
【图文】：

尿囊液,PCR扩增,肝脏

图 1 尿囊液 PCR 扩增结果Fig.1 The PCR amplification result of allantoic flui注: M:D5000 标记物 1:试验组尿囊液Note: M:D5000 marker 1. Test group allantoic fluid织学变化试验结果长实验的结果为阴性，表明抚顺株 FAdV-4 在结果株 FAdV-4 后 7d 经 4oC 冷藏 5h 后进行剖检。，左侧试验组鸡胚蜷缩，个体小，发育受阻。，肝脏呈严重黄绿色病变，肝脏表面有细小出心包积液。

鸡胚,对照组,肝脏,淤血

（3）组织病理学结果图 2 试验组鸡胚与对照组鸡胚对比Fig.2 Comparison of chicken embryos betweenexperimental group and control group图 3 试验组鸡胚肝脏与对照组鸡胚肝脏对比Fig.3 Comparison of chicken embryoliver between experimental group and controlgroup图 4 对照组肝脏（HE 染色，200×）Fig.4 The normal hepatocyte(HE stain，200x)图 5 试验组肝脏组织学损伤(HE 染色，200×)1. 窦状隙淤血 2.水泡变性 3.中央静脉淤血Fig.5 Hepatocyte histological damage in theexperimental group(HE stain，，200x)1.Sinusoidal congestion 2. Vacuolar degeneration3. Central venous
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.31

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