竹节参皂苷Ⅳa对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响

发布时间：2020-06-17 19:23

【摘要】：畜禽炎症严重威胁动物健康及养殖业的经济,探寻一种有效且低毒环保的治疗畜禽炎症的药物具有重要意义。竹节参皂苷Ⅳa(Chikusetsu SaponinⅣa,CHS-Ⅳa)是一种母核为三萜类的糖苷类化合物,为竹节参中主要活性成分,其具有降血糖、降血脂、抗病毒等药理活性。同时,CHS-Ⅳa还具有一定的抗炎效果,但其抗炎的分子机制还需进一步探究。本试验以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7建立体外炎症模型,探究CHS-Ⅳa的抗炎效果及作用的分子机制。方法与结果如下:1.采用形态学观察、MTT法检测细胞活力、Q-PCR检测细胞中IL-6的表达水平,确定LPS构建炎症模型的作用时间和浓度,结果显示,0.1、1、5、10μg/mL的LPS刺激RAW264.7细胞6、12、24 h后,细胞活力较对照组无明显变化,但LPS刺激24h后,细胞膜向外延展,呈现出梭形或多边形,LPS浓度越高该变化越明显,同时,细胞中IL-6 mRNA的相对表达较对照组也呈剂量依赖性地升高,综合考虑,选择建立炎症模型的LPS浓度为1μg/mL,时间为24 h;2.采用MTT法检测细胞活力,确定CHS-Ⅳa作用于RAW264.7细胞的安全浓度,我们发现,25μg/mL的CHS-Ⅳa无论作用12 h,还是作用24 h都显著降低了细胞活力,而3.125、6.25、12.5μg/mL的CHS-Ⅳa单独处理细胞和预处理后加LPS刺激都对细胞活力无明显影响,为作用RAW264.7细胞的安全浓度;3.ELISA检测细胞上清IL-6、IL-1β、IL-10、TNF-α水平,Q-PCR检测细胞中IL-6、IL-1β、IL-10、TNF-αmRNA的表达,结果表明,CHS-Ⅳa能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α等炎症因子分泌以及mRNA的相对表达;4.采用Western blot、Q-PCR、ELISA分别检测CHS-Ⅳa对细胞中COX-2蛋白表达、COX-2和iNOS mRNA表达及细胞上清液中PGE2、NO释放的影响,结果显示,CHS-Ⅳa能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2、iNOS的表达以及PGE2、NO的产生;5.Western blot检测CHS-Ⅳa对LPS刺激的RAW264.7细胞NF-κB信号通路中IκB-α和p65,MAPK通路中磷酸化蛋白p-p38、p-JNK、p-ERK以及JAK-STAT1通路中p-STAT1表达的影响,结果显示,CHS-Ⅳa能够升高IκB-α和p65总蛋白的表达,抑制磷酸化蛋白p-p38、p-JNK、p-ERK以及p-STAT1的表达。综上,CHS-Ⅳa可能通过抑制NF-κB、MAPK和STAT1的活化降低炎症基因的表达及炎性因子的分泌,从而达到抗炎的效果。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S853.74

【参考文献】