lncIMF4对猪肌内前体脂肪细胞增殖、分化与自噬的作用研究

发布时间：2020-06-22 05:08

【摘要】：肌肉和脂肪是决定猪肉品质的两个主要因素,而肌内脂肪是影响肌肉组织中脂肪含量的重要方面,因此探究肌内脂肪沉积的调控机制对改善猪肉品质具有重要意义。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是机体产生的一类非编码RNA,参与许多生命活动,包括细胞的增殖与分化等;目前的研究表明lncRNAs通过多种方式参与脂肪细胞的分化聚脂,但对猪肌内脂肪沉积的研究较少。本研究从脂肪型八眉猪与瘦肉型大白猪的背最长肌中分离肌内脂肪细胞,体外诱导分化0、2、4和8d后进行测序,筛选到随肌内脂肪细胞分化程度差异表达的lncIMF4,研究了其对肌内脂肪沉积的影响。首先,本研究对两种不同类型猪种及不同分化时期的肌内脂肪细胞进行测序,筛选到部分差异表达的lncRNAs;其次,通过生物信息学分析筛选到lncIMF4作为实验的研究对象;然后,合成并转染了lncIMF4 siRNA,利用EDU、CCK-8及流式细胞术等检测了lncIMF4对猪肌内脂肪细胞增殖的作用;接着利用油红O与Bodipy染色等探究了lncIMF4对细胞分化的影响;最后,本研究构建了猪肌内脂肪细胞自噬模型,研究了lncIMF4对猪肌内脂肪细胞自噬的作用,并发现lncIMF4通过自噬参与调控肌内脂肪细胞脂解。得到的主要研究结果如下:1.八眉猪与大白猪的肌内脂肪存在许多差异表达的lncRNAs;lncIMF4在肌内脂肪细胞分化过程中,表达量先增加后减少,在分化第2d表达量最高;lncIMF4在猪各组织中均有一定表达量,在脂肪组织中表达量较高;lncIMF4在猪肌内脂肪细胞核和细胞质中均有分布,主要定位于细胞核中;2.干扰lncIMF4促进猪肌内前体脂肪细胞增殖期相关周期基因CyclinD与CyclinE的mRNA与蛋白的表达(P0.05),表明干扰lncIMF4促进肌内脂肪细胞的增殖;3.干扰lncIMF4促进猪肌内脂肪细胞分化相关基因PPARγ与CEBPα等的mRNA与蛋白的表达(P0.05),且油红O染色显示出脂滴增多,表明干扰lncIMF4促进肌内脂肪细胞的分化;4.干扰lncIMF4下调猪肌内前体脂肪细胞自噬相关基因mRNA与蛋白的表达(P0.05),并发现干扰lncIMF4通过自噬抑制脂解。综上,lncIMF4在猪肌内脂肪细胞成脂过程中差异表达,干扰lncIMF4促进猪肌内前体脂肪细胞增殖与分化,抑制肌内脂肪细胞自噬。本研究筛选到lncIMF4参与调控猪肌内前体脂肪细胞增殖、分化与自噬,研究结果为lncRNAs调控猪肌内脂肪沉积提供了借鉴与参考。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S828
【图文】：

的核质分离raphPad Prism 6.0 进行绘图。结果以 means ±析 的筛选验分离取自脂肪型猪种八眉猪与瘦肉型猪种分化第 0、2、4 及 8d 收集细胞，进行测序，期的各个阶段。如图 2-1 所示，得到 lncRNA分化阶段差异表达热图。

第二章 lncIMRF4 的筛选与表达规律为了筛选调控猪肌内脂肪的 lncRNAs，随后对测序数据进行分析，利用三步法进行筛选，得到差异表达的 lncRNAs（图 2-2）。结果显示 lnc 000415 随着猪肌内脂肪细胞分化差异表达，且在八眉与大白猪中有相同的表达趋势，因此本实验将 lncRNA000415 作为本实验的研究对象，并根据前期实验结果命名为 lncIMF4（lncRNA intramuscular fat 4）。

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