液质联用仪检测畜禽肉中四环素类药物残留的条件优化

发布时间：2020-06-22 08:43

【摘要】：意义:我国是动物性食品生产和消费的大国,无论是产量还是消费水平,自2011年起就一直居于世界前茅,自我国加入WT0以来,兽药残留问题日益严重影向我国的进出口和国家的经济利益,动物源食品中的兽药残留已逐渐成为我国及全世界均关注的一个焦点;监测与控制动物源性食品中的兽药残留,保证食品安全,建立灵敏、准确、可靠的抗生素残留检测方法成为研究的重点,其中四环素类药物残留的研究就是其中的一个重点方面。我国已建立四环素类药物的标准检测方法,但目前随着国际社会对食品安全的关注,对检测方法灵敏度的要求也越来越高。近年来,液相色谱-质谱联用取得了很大进展,在各领域应用越来越广泛,尤其在食品分析领域得到了广泛的应用,其分离能力、选择性、灵敏度都具有极高的效能,不但能够提供相对分子质量,还能提供结构信息。本次试验就是以GB/T21317-2007为基础,采用液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统的方法优化试验。目的:在GB/T 21317-2007的基础上建立高效、可行的动物源性食品中四环素类抗生素LC-MS/MS同步检测方法体系,优化其提取条件、色谱条件、质谱条件,以达到高效提取,操作简单、提取结果精确可信的目的。方法:搜索一些现阶段兽药残留现状的分析报告、相关著作、文献及研究结果,初步了解了兽药残留现阶段的研究动态、前沿进展;分析目标物质提取的影响因素,采用比较研究法及实证分析法,对同一个因素进行多水平或多选择试验,得到的结果进行平均值计算,再制作坐标图,以取得最优点。优化后的条件:样品经20mL EDTA-Mcllvaine缓冲液与5mL甲醇两次提取,超声20min,5℃、10000 r/min离心15min,滤纸过滤得到上清液,经HLB固相萃取柱净化,通过5%甲醇水溶液淋洗杂质后,再用甲醇溶液洗脱,1mL甲醇-0.1%甲酸水(20:80)复溶,以乙腈:0.1%甲酸水为流动相,LC-MS/MS进行检测。结果:该次实验四种四环素类抗生素具有良好的线性关系,色谱峰型尖峭,无杂峰,r均≥0.995;其中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的检出限为0.1μg/kg;畜肉及禽肉的目标四环素加标回收率均处于80%-110%;仪器重现性RSD1%。结论:经优化过后的液质检测方法与GB/T 21317-2007相比,具有较高的选择性和灵敏度,回收率和重现性良好,外加分析条件要求低、实用性强,故此次优化较为成功,具有较好的推广价值。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S859.84
【图文】：

鱼骨图,影响因素

图 3-1 影响因素鱼骨图Fig. 3-1 Fish bone map of influencing factors3.1.1 提取液对四环素类药物回收率的影响提取液体积过少，会造成目标物质提取不完全；提取液体积过多，则会造成溶剂的浪费，进而导致检测经费的不必要输出。考虑到在提取过程中，提取液的总体积与前后两次加入的体积对目标物回收均有极大的影响，于是设计了 3.1.1.1 及 3.1.1.2 的两个试验；经查证，土霉素易溶于甲醇、丙酮，微溶于乙醇；金霉素微溶于甲醇、水、乙醇；四环素微溶于水，略溶于乙醇；强力霉素易溶于甲醇、水，微溶于乙醇、丙酮。考虑到丙酮有毒性及综合方面的原因，决定选甲醇同样作为提取液加入样品中，设计了 3.1.1.3 的试验。3.1.1.1 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液的体积变化对回收率的影响畜肉：以猪肉的阴性样品作为本底，称取质量为 5g 的样品作为平行样，分别加入 100μL1.00 μg/mL 四种抗生素混合标准溶液，即加入四种抗生素混标的绝对量为 100ng，静置 30min确保标准物质与肉样充分混合，即得到已知浓度的阳性样品；取 7 份阳性样品，分别向其中加入 5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30m、35mL EDTA-Mcllvaine 缓冲提取液，重复 5次，发现样品中加入 20mL 提取液后目标物质的回收率达到稳定状态，所以最终加入 20mL

离子通道,基质

20图 4-1 离子通道图Fig. 4-1 Ion Channel Diagram准曲线肉、鸡肉的阴性样品为基质，制作基质标曲线。过程是称取六份阴性样品量为 1-100ng 的混合标准物质，随同样品测定过程一起进行前处理，并以同样做一套基质标，结果显示其标准曲线的 r 均高于 0.995，反映出其标准好；通过不同基质的结果显示，不同基质的标准曲线不同，故后期的样本相对应的基质标处理的结果所得。）以超纯水为基质的标准曲线浓度为 0~100ng/mL，其方程及线性如表 4--2：

【参考文献】