PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪组织淋巴细胞TGF-β1、IL-10、IL-12分泌的影响

发布时间：2020-06-22 09:06

【摘要】：猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”、“神秘病(MSD)”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种能够在猪群间迅速传播的烈性传染病,该病自首次出现,短短几年遍及全球,是我国规模化养猪场防控的主要传染病。该病常与猪瘟(Classical swine fever,CSF)等其它传染病同时或相继感染于猪群,产生复杂的临床症状和病理变化,患病猪死亡率升高,使该病的防治更加困难。在PRRS的发病过程中,IL-12主要参与机体早期的抗病毒适应性免疫和驱动细胞免疫发展,TGF-β1和IL-10则影响机体的免疫抑制过程。本试验按照4周龄免疫CSF疫苗,6周龄免疫PRRS疫苗的免疫程序进行免疫接种,建立CSF、PRRS双免实验猪模型,用自主设计并由商业合成的四种PRRSV特异性肽(G1aa100-108、G2 aa96-104、N1 aa106-114、N2 aa49-57)刺激CSF、PRRS双免实验猪骨髓、胸腺、肺门淋巴结以及脾脏分离培养的淋巴细胞,应用Porcine ELISA检测试剂盒检测肽刺激24h和48h后培养上清中TGF-β1、IL-10、IL-12的分泌含量的变化,探讨三种细胞因子的分泌特点,反映动物机体免疫应答的本质,为猪养殖产业PRRS的防治提供实验数据。24h肽刺激组检测结果显示,骨髓中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-12的分泌量与空白对照组相比降低,尤其在PRRSV特异性N肽刺激下差异显著(P0.05)。胸腺中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-12的分泌量较空白对照组降低,差异不显著。肺门淋巴结中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量较空白对照组降低,差异不显著,IL-12分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05)。脾脏中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异不显著;IL-10的分泌量在PRRSV特异性G肽刺激后,与空白对照组相比降低,差异显著(P0.05);IL-12的分泌量在PRRSV特异性N肽刺激后,与空白对照组相比升高,尤其在PRRSV特异性N2肽刺激下差异显著(P0.05)48h肽刺激组检测结果显示,骨髓中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量与空白对照组相比降低,尤其在PRRSV特异性N肽刺激后差异显著(P0.05);IL-12的分泌量在PRRSV特异性G2、N1、N2肽刺激后,与空白对照组相比降低,差异不显著。胸腺中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量与空白对照组相比降低,尤其在PRRSV特异性N肽刺激下差异显著(P0.05),IL-12的分泌量与空白对照组相比降低,差异不显著。肺门淋巴结中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-10的分泌量较空白对照组降低,差异显著(P0.05),IL-12的分泌量与空白对照组相比降低,尤其在PRRSV特异性N1肽刺激下差异显著(P0.05)。脾脏中分离出的T淋巴细胞经过PRRSV特异性G肽刺激后,TGF-β1的分泌量较空白对照组降低,差异不显著;IL-10的分泌量在PRRSV特异性G肽刺激后,与空白对照组相比降低,差异不显著;IL-12的分泌量在PRRSV特异性G肽和N肽刺激后,与空白对照组相比升高,尤其在PRRSV特异性N2肽刺激下差异显著(P0.05)。结果表明,实验猪在CSF、PRRS疫苗免疫成功的情况下,机体免疫系统处于相对敏感的免疫应答状态,能够对四种PRRSV特异性肽的刺激产生较强的反应。当CSF、PRRS免疫状态良好时,四种PRRSV特异性肽能够对骨髓、胸腺和肺门淋巴结中TGF-β1、IL-10的分泌产生抑制作用,弱化对机体的免疫抑制作用。在对IL-12的影响上,G1、G2肽刺激后,有明显的促进其分泌的趋势,但仍需要进一步的试验验证。此外,从数据上可以看出,N1、N2肽对组织器官中细胞因子分泌的影响比G1、G2肽更显著,具有更强的作用效果。本试验结合课题组前期的试验结果,为PRRSV合成肽疫苗的研制提供理论和数据支持。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.28
【图文】：

细胞表型,胸腺,骨髓,脾脏

用 ELISA 抗体检测试剂盒，对 3 头实验猪的血清样本进行检测，，CSFV 抗体阻断率均大于 40%，IPRC 值均大于 20，PCV2 样本499，PRV 样本的 S/N 大于 0.70。表 1. 5 实验猪抗体的检测结果Table 1.5 Detection results of antibodies of experimental pigsCSFV 抗体阻断 ELISA 检测方法（抗体阻断率/%）PRRSV 抗体间接酶联免疫吸附试验（IPRC 值）结50.68% 24.29 72.28% 26.31 61.59% 24.53 胞鉴定结果过流式细胞术，检测骨髓、胸腺、肺门淋巴结以及脾脏中分离出的果显示，被检测的样本中含有 CD3、CD4 以及 CD8 抗原（见图

分泌量,淋巴细胞

图 2.1 24h 肽刺激组 TGF-β1 的分泌量。与空白对照组相比 P<0.05 为显著性变化，用*表示。.1 The secretion levels of TGF-β1 secreted by T-lymphocytes24 hours. Compared with the blank control group, signigicantly changed,which was expressed by *.10 分泌量的变化织器官中的 T 淋巴细胞经 PRRSV 特异性 G 肽的刺激后，量的变化如图 2.2，骨髓、胸腺和脾脏中的 T 淋巴细胞，经激后，IL-10 的分泌量与空白对照组相比降低，差异显著（中的 T 淋巴细胞分泌的 IL-10，与空白对照组相比降低，差

【参考文献】