表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病病毒活载体疫苗研究

发布时间：2020-07-02 01:17

【摘要】：鸡马立克氏病(Marek's disease,MD)和鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是危害我国养禽业健康发展的两种重要的免疫抑制病,其广泛流行给我国养禽业带来了巨大的经济损失。疫苗是控制MD和IBD的主要手段。目前MD主要通过血清1型弱毒疫苗预防。用于预防IBD的疫苗主要是传统活疫苗和灭活疫苗,但传统疫苗不仅易于受到母源抗体的干扰,而且IBD中等毒力活疫苗可以造成一定程度的法氏囊损伤和免疫抑制,因此迫切需要研制更加安全有效的新型IBD疫苗。本研究对我国IBDV超强毒(wIBDV)分离株的遗传变异、抗原性和致病性进行了分析。结果发现,我国wIBDV毒株正在发生持续性进化。与我国早期wIBDV分离株相比,我国2000年后分离的vvIBDV毒株的基因组A、B节段均有一定程度的变异发生;我国vvIBDV毒株与欧洲wIBDV参考毒株的抗原性无显著差异;目前wIBDV毒株的致病性有增强趋势。wIBDV HLJ0504毒株是目前我国的wIBDV流行毒株。鸡马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)弱毒疫苗株是构建重组活载体疫苗的理想载体。为了构建表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗,本研究将MDV血清1型弱毒疫苗814株基因组DNA分段插入Fosmid粘粒,构建了 814株基因组粘粒文库;在此基础上,选取粘粒组合,建立了 MDV 814疫苗株多片段粘粒拯救系统。将eGFP基因表达盒分别插入MDV 814 株基因组不同位点,拯救获得5株稳定表达eGFP的重组病毒。经鉴定,5株重组病毒的复制特性与原疫苗株病毒基本一致;eGFP基因在UL区三个位点的表达水平无显著差异,高于US2位点,US10位点的表达水平最低。将wIBDV HLJ0504株的VP2基因分别插入MDV 814株基因组的UL41、US2、US10位点,获得3株表达VP2基因的重组MDV(r814UL41VP2、r814US2VP2 和 r814US10VP2)。其中,r814US2VP2免疫SPF鸡后,能够对wIBDV和wMDV的攻毒提供完全保护。通过r814US2VP2(命名为rMDV-VP2株)最小免疫剂量试验,确定了该疫苗的使用剂量为2000PFU/羽份。rMDV-VP2疫苗对wIBDV的保护效果与商品化Vaxxitek HVT-IBD疫苗相当,优于IBD中毒力活疫苗;rMDV-VP2疫苗对wMDV的保护效果与商品化MDV血清1型弱毒疫苗相当,显著优于Vaxxitek HVT-IBD疫苗。rMDV-VP2疫苗对不同的wIBDV分离株都能提供高效免疫保护,可以用于不同品种的商品蛋鸡和地方品种鸡。rMDV-VP2疫苗的免疫保护可以覆盖IBDV的易感期(3-8周龄),并具有至少6个月的抗体持续期。rMDV-VP2疫苗对靶动物和非靶动物均是安全的;rMDV-VP2疫苗的水平传播能力极低,无垂直传播现象;疫苗株病毒免疫鸡后的排毒水平极低,在使用环境中不存在该疫苗株病毒及其病毒DNA的残留。综上所述,rMDV-VP2疫苗安全有效,可以作为一种IBD-MD重组二联活疫苗用于IBD和MD的预防。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：博士后
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.65
【图文】：

国农业科学院博士后出站报告逦第一章典毒株、超强毒株和变异毒株。上世纪８０年代，美国首次分离Ｄ的变异株，相继美国之后，中美洲［１３］和澳大利亚％也有变异株的。欧洲在］９８７年报道了邋ＩＢＤＶ超强毒株（ｖｖＩＢＤＶ）的出现［１５］。逡逑我国的ＩＢＤＶ毒株最早于１９８２年报道，分离于北京（ＣＪ８０１株＃。８０年代末和９０年代初期，ＩＢＤＶ变异株和超强毒株开始在我国，给我国的养禽业造成了巨大的经济损失［１６，１７］。我国９０年代分离ＩＢＤＶ毒株的毒力介于欧洲ｖｖＩＢＤＶ参考毒株和经典毒株之间；与ｖｖＩＢＤＶ参考毒株相比，我国ｖｖＩＢＤＶ基因组Ｂ节段发生了一定的，在遗传进化树上处于一个独立的分支［１９］。然而，随着ＩＢＤ疫苗的使用，我国ｖｖＩＢＤＶ也在发生不断的变异，具有毒力增强的趋势［２Ｑ］。逡逑

ｗＩＢＤＶ最先在比利时出现，随后在欧洲大陆迅速蔓延１８］，传到英国、逡逑爱尔兰，在很短的时间内又传至日本、以色列、南非。然后传至东欧和逡逑亚洲，后来非洲、南美洲也开始有ｗＩＢＤＶ的流行（图１．１）。ｗＩＢＤＶ逡逑虽然抗原性和经典株一样，但其致死率很高，给养禽业造成了严重的损逡逑失，而且由于变异和环境等各种因素的影响，在有些地区，该病的疫苗逡逑免疫效果并不理想［９，１Ｑ】。逡逑１．１．２我国ｗＩＢＤＶ的流行趋势逡逑ＩＢＤＶ共有两个血清型，即对鸡有致病力的血清Ｉ型和无致病力的逡逑血清ＩＩ型。利用病毒中和试验（ＶＮ）可以区分两个血清型，但是不能逡逑用荧光抗体和ＥＬＩＳＡ加以区分。两种血清型之间不存在免疫交叉保护作逡逑用［１１，１２＾血清Ｉ型ＩＢＤＶ根据ＳＰＦ鸡的致死率和病毒中和试验又可分为逡逑１逡逑

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本文编号：2737540