奶山羊亚急性瘤胃酸中毒引起肝脾炎症及指征检测与分析

发布时间：2020-07-09 19:51

【摘要】：现代生产中,给奶畜饲喂高精料日粮来满足泌乳能量需求的饲喂模式已成为一种流行趋势,但反刍动物摄入过多的高精料会导致瘤胃中挥发性脂肪酸的积累和脂多糖等有害物质的释放增加。挥发性脂肪酸的累积会增加亚急性瘤胃酸中毒(subacute ruminal acidosis,SARA)的发病率;脂多糖经门静脉入肝脏,会影响肝脏形态和代谢功能,并诱导肝细胞凋亡,使肝脏功能减弱;脂多糖经体循环进入脾脏还会对脾脏造成损伤,从而影响反刍动物的健康。本研究以关中奶羊为动物模型,模拟实际生产中的喂养模式,通过在日粮中添加高比例的精料诱导SARA模型,研究SARA对泌乳期关中奶山羊肝脾炎症因子和肝脾细胞凋亡的影响,以期为奶山羊SARA与肝脾炎症反应关系和细胞凋亡的研究积累资料,结果对奶山羊养殖中高精料日粮的使用和实际生产中奶牛和奶山羊等反刍动物的养殖有一定的指导意义。本研究的内容和结果如下:试验选用16只体重相近、健康状况良好,2-3胎龄的奶山羊,随机分为对照组和高精料组,每组8只,对照组奶山羊饲喂精粗比为35∶65的日粮,高精料组奶山羊饲喂精粗比为65∶35的日粮,试验期19周,在试验期间所有奶山羊可自由饮水。1.在试验的第7周、第9周、第11周、第13周、第15周、第17周和第19周,所有奶山羊颈静脉采血进行血常规分析,19周的血同时进行血液生化分析。结果显示,与对照组相比,高精料组奶山羊白细胞和淋巴细胞在整个试验过程中均无显著变化,而红细胞在试验第19周时显著升高,红细胞体积分布宽度在试验中期有显著升高(P0.05),其他血常规指标均无显著变化(P0.05);所测的生化指标均无显著变化(P0.05),提示,高精料对奶山羊的血常规和血液生化指标无显著影响,但可提高血液中红细胞数量。2.试验结束时采集肝、脾组织制作HE切片进行检测,结果显示,与对照组相比,高精料组奶山羊肝细胞肿大、发生颗粒变性和空泡变性,中央静脉有大量淋巴细胞浸润;脾脏红髓中含铁血黄素含量降低,但结构无肉眼可见变化;提示SARA对泌乳奶山羊肝脏造成炎性损伤,泌乳奶山羊脾脏中含铁血黄素含量下降。3.采集所有奶山羊肝脾组织样品,采用RT-qPCR检测肝脏和脾脏中炎性因子及其TLR4调控通路重要蛋白的基因表达。结果显示,高精料组奶山羊肝脏组织中TLR4、NF-κB2和IL-6的表达量显著升高(P0.05),其他基因变化不显著(P0.05);脾脏组织中TLR4基因表达显著升高(P0.05),NF-κB2基因表达显著下降(P0.05),抗炎因子IL-10和促炎因子TNF-β基因表达显著升高(P0.05),其他均无显著性变化。4.采用Western blot技术检测肝脾组织中TLR4信号通路重要蛋白的表达。结果显示,在肝脏和脾脏中,MAPK通路中的JNK、ERK、P-38蛋白表达量均无显著变化(P0.05),NF-κB通路中的NF-κB蛋白无显著变化(P0.05)。5.通过RT-qPCR检测肝脏和脾脏中凋亡通路上重要凋亡调控蛋白bcl-2和Bax以及凋亡执行蛋白caspase3、caspase8和caspase9基因的表达,结果显示,高精料组奶山羊肝脏和脾脏中的caspase9基因表达量均显著升高(P0.05)。采用Western blot技术检测肝脏组织caspase3蛋白的表达,结果显示,与对照组相比,高精料组奶山羊肝脾组织caspase3蛋白表达无明显变化。本研究结果显示,长期给泌乳奶山羊饲喂高精料会导致奶山羊发生SARA,SARA会使血液中红细胞数量增加;使肝细胞发生颗粒变性和空泡变性,使肝小叶中淋巴细胞浸润,导致肝脏中IL-6基因表达升高,脾脏中TNF-β基因表达升高,脾脏中含铁血黄素沉着降低,脾脏中NF-κB基因表达量降低,表明长期给泌乳奶山羊饲喂高精料日粮,导致奶山羊发生SARA,产生的LPS经TLR4受体通路导致肝脾脏中IL-6、TNF-β等炎性因子表达升高,从而会对奶山羊肝脾脏造成炎性损伤。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.27
【图文】：

亚急性瘤胃酸中毒对泌乳期奶山羊表观指标及肝脾形态结构诊断结果中，随时观察奶山羊临床症状。前期高精料组奶山羊状等与对照组相比无明显差异，到试验后期，高精料组佳，粪便形态呈扁状异常。于试验的第 0 周、1 周，4 周18 周和 19 周采集所有奶山羊的乳汁，监测乳脂率，结果料饲喂时间的延迟，高精料组奶山羊乳汁中的乳脂率不 19 周，与对照组相比差异显著，（P < 0.05）。试验结束日料导致高精料组奶山羊粪便 pH 下降（图 2-2）。表明

与对照组相比差异显著，（P < 0.05）。试验导致高精料组奶山羊粪便 pH 下降（图 2-2）。表图 2-1 高精料日粮对泌乳奶山羊乳脂率的影响ect of high-precision diet on milk fat percentage of lactatin著（P < 0.05），（n = 8）。P 值是“均值 ± SEM”（以下ant difference between groups （P < 0.05）, （n = 8）

图 2-3 SARA 对肝脏组织结构的影响Fig. 2-3 Effect of SARA on liver tissue structureA 和 B 是对照组，C 和 D 为高精料组，其中 A 和 C 放大倍数为（100×）；B 和 D 放大倍数为（400×）A and B are the control group, C and D are the high concentrate group, wherein themagnifications of A and C are（100×）;B and D magnifications are（400×）

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本文编号：2747904