抗病毒颗粒的安全性及其临床疗效研究

发布时间：2020-07-10 10:42

【摘要】：目的:研究抗病毒颗粒对靶动物鸡的安全性及其对人工感染鸡传染性支气管炎的临床疗效,以期为抗病毒新药的研发提供依据。方法:评价抗病毒颗粒对靶动物鸡的安全性,选用8日龄健康伊莎褐蛋公鸡100只,随机分为5组,每组20只,设置抗病毒颗粒推荐剂量的1倍剂量组(4 g/L)、3倍剂量组(12g/L)、5倍剂量组(20g/L)和10倍剂量组(40g/L)。4个用药组持续饮水给药5 d,试验期间,每天观察记录鸡的精神状态、进食情况、二便性状等一般临床表现,测定试验前后的增重、脏器指数、血常规指标、血清生化指标并观察组织病理学变化。研究抗病毒颗粒对鸡传染性支气管炎(IB)的治疗作用,选取8日龄伊莎褐蛋公鸡360只,随机分为6组,除空白对照组外,均按照10427EID50IBV第3代鸡胚尿囊液滴鼻点眼0.2 mL/只,感染72 h,3个药物剂量组分别在饮水中按2 g/L水、4g/L水、8g/L水的剂量添加抗病毒颗粒,阳性药物组按25g/kg饲料添加麻杏石甘散,连续给药5d,空白对照组不添加任何药物,病毒对照组攻毒后不做其他处理。测定各试验组临床疗效、平均增重、免疫器官指数、靶器官中IBV N基因表达量、气管中IFN-β表达量及组织病理学的观察。结果:1、靶动物安全性试验中,与空白对照组相比,各组鸡的平均增重、脏器指数、血常规指标、血清生化指标及组织病理学观察均无显著性差异(p0.05)。2、抗病毒颗粒高、中剂量组的总有效率分别为90.00%和86.67%,痊愈率分别为80.00%和76.67%,死亡率分别为10.00%和13.33%,能够促进鸡增重及免疫器官发育,且显著改善组织病理变化。3、与病毒对照组相比,抗病毒颗粒各剂量组、麻杏石甘散组气管、支气管、肺脏中IBVN基因的表达量均显著降低(p0.05)。与麻杏石甘散组相比,抗病毒颗粒各组气管、支气管、肺脏中IBVN基因的表达量差异不显著(p0.05),但抗病毒颗粒高、中剂量组均有降低的趋势。4、与病毒对照组相比,抗病毒颗粒高、中剂量组能显著诱生IFN-β的表达(p0.05)。与麻杏石甘散组相比,抗病毒颗粒高剂量组能显著上调IFN-β的表达(p0.05)。结论:1.按抗病毒颗粒推荐剂量的1倍剂量(4g/L)、3倍剂量(12g/L)、5倍剂量(20 g/L)和10倍剂量(40 g/L),持续饮水给药5 d,对靶动物鸡无毒副作用,临床使用安全。2.抗病毒颗粒能够有效治疗IB,在感染IBV72h后,按抗病毒颗粒高剂量(8g/L)、中剂量(4g/L),持续饮水给药5d,对人工感染IB有显著的治疗作用。
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S859.7
【图文】：

模式图,传染性支气管炎病毒,粒子结构,基因组

图１传染性支气管炎病毒粒子结构及基因组模式图，引自（Ｊａｃｋｗｏｏｄ，邋Ｈａｌｌ，邋ａｎｄ邋Ｈａｎｄｅｌ，邋２０１２；逡逑Ｐｅｒｌｍａｎ邋ａｎｄ邋Ｎｅｔｌａｎｄ，邋２００９）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｓｔｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ邋ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ邋ｖｉｒｕｓ邋ｖｉｒｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｅ．逡逑Ｔｈｉｓ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｉｓ邋ｃｉｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋（Ｊａｃｋｗｏｏｄ，邋Ｈａｌｌ，邋ａｎｄ邋Ｈａｎｄｅｌ，邋２０１２；邋Ｐｅｒｌｍａｎ邋ａｎｄ邋Ｎｅｔｌａｎｄ，邋２００９）．逡逑１．２邋ＩＢＶ结构蛋白和功能逡逑ＩＢＶ基因组编码４种结构蛋白，即纤突蛋白Ｓ邋（Ｓｐｉｋｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋）、膜进白Ｍ逡逑（Ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）、核蛋白邋Ｎ邋（Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）和小分子膜蛋白邋Ｅ邋（Ｓｍａｌｌ逡逑ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）。它们与病毒粒子的侵入、组装与释放有关。逡逑１．２．１邋Ｓ蛋白逡逑Ｓ蛋白以嵌入的方式存在于病毒囊膜，是高度糖基化的跨膜蛋白，构成病毒逡逑粒子表面的纤状突起。Ｓ蛋白可与它的受体0２，３唾液酸结合，也可以诱导病毒与逡逑细胞融合［８］。它被宿主细胞蛋白酶裂解产ｚｔ：Ｎ端的Ｓ１蛋白和Ｃ端的Ｓ２蛋白，两者逡逑之间连接形成Ｓ蛋白单体。ＩＢＶ感染时，Ｓ２蛋白疏水的？端嵌入病毒的囊膜内，逡逑

抗病毒颗粒,形式,数据,囊指

均无明显病变。试验结果表明，抗病毒颗粒对各器官无毒害作用。逡逑３．１．６器官指数逡逑由图２可知，各剂量组的心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、肺脏指数、肾脏逡逑指数、胸腺指数和法氏囊指数与空白对照组相比，均无显著性差异００．０５），且逡逑各剂量组之间也均无显著性差异（＾＞０．０５）。试验结果表明

条带,肺脏,组和模,气管环

不同程度的咳嗽及气管Up音。逡逑３．３．２剖检病变逡逑空白对照组和模型组的剖解典型变化见图４。山图４可知，感染鸡胸腺、喉头逡逑有不同程度的出血点，气管环内有大量黏液，个别有黄色干酪样物质附着，肺脏逡逑组织水肿、出血，气囊浑浊变厚，空白对照组无任何病变。逡逑灥攦Ｉ逡逑图４剖检病变逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｈｉｃｋｅｎｓ逡逑３．３．３感染模型ＩＢＶＮ基因的检测逡逑用合成的ＩＢＶ邋Ｎ基因的引物进行普通ＰＣＲ反应扩增目的基因，取ＰＣＲ产逡逑物和６邋｜ａＬ邋ＤＮＡ邋Ｍａｒｋｅｒ，使用３％琼脂糖凝胶电泳检测目的条带。结果如图５所逡逑示，阴性对照组无条带，病料组在１５４邋ｂｐ处有３条清晰明亮的条带，１、２、３逡逑分别为模型鸡只肺脏、气管、支气管扩增出的ＩＢＶＮ基因特异性条带，无二聚逡逑体和非特异性扩增，且与预期片段大小（１５４ｂｐ）相一致，证明该引物特异性良逡逑好

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